产品货号 | 产品规格 | 目录价 | 促销价 |
HX3008S | 50次 | 554.00 | 498.00 |
HX3008M | 200次 | 1665.00 | 1498.00 |
▍产品信息
Cell-free DNA抽提试剂盒(磁珠法),也称游离DNA抽提试剂盒、血液游离DNA抽提试剂盒或血清游离DNA抽提试剂盒,是一种使用新型核酸纯化介质包被的磁珠,用于稳定、高效、便捷地分离血清和血浆样品中游离于细胞外的DNA(Cell-free DNA, cfDNA)的试剂盒。 游离于细胞外的DNA (Cell-free DNA),简称游离DNA,又称游离循环DNA (Circulating cell-free DNA),是指循环血液中游离于细胞外的DNA,是机体内源性降解产生的DNA。Cell-free DNA片段通常小于1000 bp,浓度个体差别较大,通常在1100 ng/ml,Cell-free DNA被发现与某些疾病如癌症等关系密切,对疾病的早期诊断、预后、检测具有重要价值。抽提所得的游离DNA可直接用于PCR、qPCR、NGS、DNA甲基化定量检测等实验。血清或血浆样品在裂解液和蛋白酶K的作用下迅速裂解,释放出来的Cell-free DNA在特定条件下与磁珠特异性结合,在外界磁场(如磁分离架)的作用下,磁珠与相应溶液可以快速而高效地分离,再经洗涤充分去除杂质,最后用洗脱液将Cell-free DNA从磁珠上洗脱下来。具有抽提效果稳定、纯度高、操作灵活便捷等优点。经过反复测试和优化,能回收低至1 ng/ml DNA片段。样品裂解仅需10 min,裂解完成后抽提的时间仅约25-30 min,比很多同类产品具有明显的优势。使用安全和便捷,目前游离DNA抽提的方法主要为酚氯仿法、柱纯化法和磁珠法,传统的酚氯仿法不仅涉及有毒有刺激的有机溶剂,而且抽提时间长、操作繁琐。柱纯化法通常需要反复离心,或者需要特殊的抽滤装置。而磁珠法条件温和,整个操作步骤无需繁琐的反复离心或抽滤操作,而以简单的磁铁吸附代替,确保了操作的快速和便捷。本试剂盒适用于新鲜或冻存的血清或血浆Cell-free DNA的抽提,最低适用于20 µl血清/血浆样品的抽提,对于-80ºC保存的样品须避免多次反复冻融。小包装可用于50次Cell-free DNA抽提,中包装可用于200次Cell-free DNA抽提。
▍产品应用
是一种使用新型核酸纯化介质包被的磁珠,用于稳定、高效、便捷地分离血清和血浆样品中游离于细胞外的DNA的试剂盒。抽提所得的游离DNA可直接用于PCR、qPCR、NGS、DNA甲基化定量检测等实验。
▍产品保存
蛋白酶K -20ºC保存,其余均室温保存,一年有效。其中磁珠悬浮液长期不使用时,4ºC保存,可以保存更长时间。蛋白酶K在室温(15-25ºC)存放一周,活力无明显下降。
▍产品组分
组分编号 | 组分名称 | 组分规格 | |
HX3008-1 | 磁珠悬浮液 | 1 ml | 4 ml |
HX3008-2 | 裂解液 | 10 ml | 40 ml |
HX3008-3 | 洗涤液I(第一次使用前加入7 ml/27 ml无水乙醇) | 21 ml | 81 ml |
HX3008-4 | 洗涤液II(第一次使用前加入24 ml/90 ml无水乙醇) | 16 ml | 60 ml |
HX3008-5 | 洗脱液 | 5 ml | 20 ml |
HX3008-6 | 蛋白酶K | 0.5 ml | 2 ml |
▍注意事项
1. 需自备无水乙醇和磁分离装置。
2. 温度较低时样品裂解液中可能会有沉淀产生,属正常现象。使用前必须检查一遍。如有沉淀,55ºC水浴孵育使沉淀溶解,混匀后使用。裂解液对人体都有刺激性,操作时请小心,并注意适当防护。
3. 磁珠在静置后会发生沉降,使用前一定要适当涡旋震荡或颠倒数次至充分混匀。磁分离前应适度震荡离心管使磁珠充分分散后再靠近磁场。如果出现磁珠挂壁现象,可以在磁珠聚集后晃动管内液体,使挂壁的磁珠流下。本产品适用于手工抽提,也可用于工作站或核酸自动提取仪。
4. 第一次使用前洗涤液I和洗涤液II需按照说明书和标签上的指示添加无水乙醇,混匀,并在瓶上做好标记。
5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
1. 取血清或血浆样品20-200 µl,加入200 µl裂解液,10 µl蛋白酶K,Vortex混匀或震荡,56ºC孵育裂解10 min。
2. 冷却至室温,每管加入200 µl无水乙醇,再加入20 µl磁珠悬浮液(使用前务必混匀),轻柔混匀后,室温放置5 min,其间轻柔颠倒1-2次。将离心管置于磁力架的磁场中,待磁珠完全聚集后,小心吸除残液。
3. 加入500 µl洗涤液I,轻柔震荡使磁珠分散开,颠倒两次后将离心管置于磁力架的磁场中,待磁珠完全聚集后,尽量吸净残液。
4. 加入600 µl洗涤液II, 轻柔震荡使磁珠分散开,颠倒两次后将离心管置于磁力架的磁场中,待磁珠完全聚集后,尽量吸净残液。
5. 将离心管室温放置5-10 min,或置于37ºC鼓风烘箱5 min,确保残留的乙醇等微量液体完全挥发。
6. 加入35-50 μl洗脱液,轻柔震荡使磁珠悬于溶液中,室温孵育3-5 min,其间甩动离心管1-2次。将离心管置于磁场中,待磁珠完全聚集后,小心吸取溶液至新离心管中,置于-20ºC保存。所得溶液即为高纯度cell-free DNA。
注:
1) 加入无水乙醇后可能会有白色絮状物出现,此为正常现象。
2) 磁珠在使用前一定要涡旋或震荡混匀。如有必要,可适当增加磁珠用量,延长结合时间以提高得率。
3) 洗涤时如果离心管内盖有磁珠,可按住离心管整体上下颠倒两次,使磁珠被完全吸附,然后弃去上清。
4) 如需获得更高浓度的样品,可把洗脱液的体积减小至20 µl,但洗脱下来的DNA量会相对减少。室温较低时,洗脱液在37ºC预热片刻对得率有所帮助。此外,洗脱后的溶液再次加回到原磁珠再洗脱一次,可提高得率约10-30%;或者在第一次洗脱后使用新的洗脱液再洗脱一次,会获得约为第一次洗脱量15-40%的DNA。
Q:为什么DNA完全或部分降解?
A:环境中DNase污染;取材不新鲜或反复冻融,可以取新鲜样品,低温保存来避免;提取过程操作过于剧烈,可以在裂解后的操作适当轻柔。
Q:为什么电泳的DNA条带拖带弥散或加样孔位置较亮?
A:DNA上样量过多,可以按照胶孔体积适当加入;有蛋白等杂质污染;DNA完全或部分降解;电泳条件不对或需要更换使用新的电泳缓冲液;一些较大的基因组会堵在孔中,较难发生电泳迁移,造成孔内较亮。琼脂糖凝胶浓度较高会造成孔内较亮,合适的凝胶浓度通常宜为0.8-1%。