哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒

基因组DNA提取/哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒

哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒

产品货号	产品规格	目录价	促销价
HX3006	50次	204.00	183.00

▍产品信息

哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒，采用了经典的蛋白酶K处理法，可以抽提到100-150 kb以上的基因组DNA。抽提到的基因组DNA适用于Southern杂交、基因组DNA的PCR扩增及基因组DNA文库的构建等。使用本试剂盒，从20 mg组织可以抽提到约40 µg基因组DNA，从10⁶-10⁷Hela细胞可以抽提到约5-50 µg基因组DNA。本试剂盒足够抽提50个常规量的样品。

▍产品应用

可以抽提到100-150 kb以上的基因组DNA。抽提到的基因组DNA适用于Southern杂交、基因组DNA的PCR扩增及基因组DNA文库的构建等。

▍产品保存

-20ºC保存，一年有效。10M 醋酸铵和Nuclease Free Water也可以室温保存。

▍产品组分

组分编号	组分名称	组分规格
HX3006-1	样品裂解液	30 ml
HX3006-2	蛋白酶K	130 µl
HX3006-3	10 M 醋酸铵	6 ml
HX3006-4	Nuclease Free Water	6 ml

▍注意事项

1. 需自备Tris平衡苯酚、氯仿和无水乙醇。

2. 如果打算抽提到大片段的基因组DNA，要尽量避免基因组DNA的物理性剪切。如避免剧烈振荡含有基因组DNA的样品，可以用剪掉枪头尖的枪头吸取含有基因组DNA的样品。

3. 不可过分干燥基因组DNA沉淀，否则会极难溶解。

4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. 样品收集。

a. 对于组织样品：切下组织，并剪切成小块，置液氮中冻结，研碎或捣碎。

b. 对于贴壁细胞：胰酶消化后，PBS或生理盐水洗一次，1000-2000 g离心1-2 min，弃上清，收集细胞。

c. 对于悬浮细胞：1000-2000 g离心1-2 min，弃上清，收集细胞。

2. 基因组DNA抽提。

a. 样品处理完毕后，每1 ml样品裂解液中加入5 µl蛋白酶K，混匀。

b. 对于上述处理好的样品，每20 mg组织或10⁶-10⁷个细胞中加入500 µl添加了蛋白酶K的样品裂解液，颠倒混匀数次，充分裂解组织或细胞。

c. 50ºC水浴消化过夜。

d. 加入500 µl Tris平衡苯酚抽提样品。

e. 吸出酚相及中间相（可以吸除少量靠近中间相的水相液体），剩余的水相用等体积Tris平衡酚再抽提一次。

f. 吸出酚相及中间相（可以吸除少量靠近中间相的水相液体），剩余的水相用等体积氯仿再抽提一次。

g. 吸出约300 µl上清液，加入60 µl 10M醋酸铵和600 µl无水乙醇，颠倒数次混匀，此时可见DNA沉淀产生。

h. 10, 000 g 离心1 min，弃上清。加入70%乙醇洗涤DNA沉淀两次。

i. 尽量吸除残余的乙醇，待看不到明显的液体时，立即加入50-100 µl Nuclease Free Water溶解DNA。不可过分干燥基因组DNA沉淀，否则会极难溶解。如果发现DNA沉淀难以溶解，可以在4ºC用摇床缓慢摇动过夜，以溶解DNA沉淀。

下载产品使用说明书

Q：为什么DNA完全或部分降解？

A：环境中DNase污染；取材不新鲜或反复冻融，可以取新鲜样品，低温保存来避免；提取过程操作过于剧烈，可以在裂解后的操作适当轻柔。

Q：为什么电泳的DNA条带拖带弥散或加样孔位置较亮？

A：DNA上样量过多，可以按照胶孔体积适当加入；有蛋白等杂质污染；DNA完全或部分降解；电泳条件不对或需要更换使用新的电泳缓冲液；一些较大的基因组会堵在孔中，较难发生电泳迁移，造成孔内较亮。琼脂糖凝胶浓度较高会造成孔内较亮，合适的凝胶浓度通常宜为0.8-1%。

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