产品货号 | 产品规格 | 目录价 | 促销价 |
HX1015S | 1 ml | 67.00 | 60.00 |
HX1015M | 5 ml | 252.00 | 226.00 |
▍产品信息
2X Fusion PCR Master Mix 是一种使用了高保真、扩增速度可以达到15 s/kb的高保真PCR扩增用的2X预混液。本产品中含有2X Fusion DNA Polymerase,2X Fusion Buffer (with Mg2+),2X dNTP,只需加入适量引物、模板和水即可进行高保真PCR扩增。大大简化了PCR操作,使操作更加快捷,也减少了PCR操作过程中可能导致的污染,使PCR的重复性更好。
利用2X Fusion PCR Master Mix 可以进行各种常规的PCR扩增,特别适合用于高保真和快速的定性和半定量的PCR扩增,以及长片段DNA(长度最长可以超过12 kb)的基因扩增和克隆。扩增速度极快,扩增小于6 kb的DNA片段时,延伸1 kb只需要15 sec。普通的DNA聚合酶延伸1 kb通常需要1-2 min。由于其超快的扩增速度,可以显著缩短PCR扩增所需的时间。
2X Fusion PCR Master Mix 是一种高保真DNA聚合酶,不仅可以非常高效地催化5’至3’方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合反应,同时还具有3’至5’的外切酶活性(proofreading activity),它的错误发生概率比Taq酶要低52倍,比pfu酶要约低6倍。
2X Fusion PCR Master Mix 的扩增长度长,非常适合长片段DNA的扩增,扩增出来的片段可以轻松达到12 kb,更长片段的扩增效果未经测试。可以轻松胜任具有复杂二级结构的、非常长的DNA片段的准确扩增,因此它是目的基因扩增和克隆的理想选择。本产品稳定性高,经测试,反复冻融15次后对PCR的扩增效果无显著影响。每ml的本产品用于50 μl的PCR反应体系,足够用于40个反应;用于20 μl的PCR反应体系,足够用于100个反应。
▍产品应用
高保真PCR(high fidelity PCR)、点突变、PCR克隆等。扩增出来的DNA片段为双平端,可以直接用于双平端克隆,但不能直接用于常规的T载体克隆。如需用于T载体克隆,需在PCR扩增结束后加入常规量的普通Taq酶在72°C反应5-10 min,使每条链的3’端加上一个A以形成粘端。
▍产品保存
-20℃保存,至少一年有效,适当避免反复冻融。如需频繁使用,可取适量存放于4℃,至少3天内有效。
▍产品组分
组分编号 | 组分名称 | 组分规格 | |
HX1015 | 2X Fusion PCR Master Mix | 1 ml | 1ml×5 |
▍注意事项
1. 由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍,在使用2X Fusion PCR Master Mix 时请注意避免微量待扩增DNA的污染,并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
2. 尽管本产品经过15次反复冻融后仍具有和冻融前几乎相同的PCR扩增效果,但仍宜适当避免反复冻融本产品,多次反复冻融可能使产品性能下降。使用本产品前,一定要完全融化,并上下颠倒轻轻混匀后才能使用,尽量避免起泡。
3. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
1. 融解并混匀PCR反应所需的各种溶液。PCR反应体系的设置:
试剂 | 最终浓度 | 体积 | 体积 |
双蒸水或Milli-Q水 | - | (21-x)μl | (8.4-y)μl |
模板DNA | 10 pg-1 μg | x μl | y μl |
引物混合物(10 μM each) | 0.8 μM | 4 μl | 1.6 μl |
2X Fusion PCR Master Mix | 1X | 25 μl | 10 μl |
总体积 | - | 50 μl | 20 μl |
2. 推荐的PCR反应程序如下:
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 92℃ | 3 min | 1 |
变性 | 92℃ | 30 sec | 30-35 |
退火 | 55℃ | 30 sec | |
延伸 | 68℃ | 15 sec-60 sec/kb | |
最终延伸 | 68℃ | 10 min | 1 |
注:
1) 对于不同类型的模板在50 μl反应体积中推荐用量如下:哺乳动物基因组DNA:0.1-1 μg;大肠杆菌基因组DNA:10-100 ng;质粒DNA:0.1-10 ng。过多的模板DNA容易导致非特异性的PCR产物。
2) 反应前用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀,室温离心数秒,使液体积聚于管底。如果PCR仪没有热盖,则在管内滴入一滴矿物油。
3) PCR反应的设置需根据模板、引物、PCR产物的长度和GC含量等条件的不同设定不同的PCR反应条件包括温度、时间和循环数等。延伸步骤的时间设置需根据PCR产物的长度进行设置,对于本产品扩增小于6 kb的DNA片段时,推荐每kb产物的延伸时间为15 sec。扩增大于6 kb的DNA片段时,推荐每kb产物的延伸时间为1 min。
4) 对于初次进行的PCR,为尽量确保可以扩增出预期的PCR产物,可以把循环数设置为35。对于需进行半定量或定量的PCR反应循环数一定要进行适当优化,使PCR反应没有达到平台期。
Q:PCR产物非常少或没有特异性条带是什么原因呢?
A:引物设计不佳是PCR过程中最常见的问题。请选择适当的引物设计软件进行引物设计,注意引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等方面的问题。在加入酶切位点等的引物中,一定要注意加入酶切位点等后整条引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等方面的问题。在原有引物效果不佳的情况并且阳性对照引物可以正常工作的情况下,可以考虑更换引物。
Q:待扩增片段GC含量偏高怎样做?
A:GC含量较高的情况下PCR会变得相对比较困难,此时可以使用适合扩增高GC含量DNA片段的GC-rich buffer,并相应地根据GC-rich buffer的要求或说明调整PCR反应参数的设置。
Q:PCR Mix可以减少体系么?
A:可以,使用的引物、模板等比减少使用。