High-Fidelity DNA Polymerase（超强高保真，平末端）

高保真PCR/High-Fidelity DNA Polymerase（超强高保真，平末端）

能识别和扩增含有尿嘧啶和次黄嘌呤的模板DNA的超高性能DNA聚合酶，具有扩增速度快、保真度极高、扩增片段可以轻松达到12 kb等优点，还可以利用dUTP 和dITP 进行基因扩增。

产品货号	产品规格	目录价	促销价
HX1014S	100 U	228.00	205.00
HX1014M	500 U	939.00	845.00
HX1014L	2000 U	3106.00	2795.00

▍产品信息

High-Fidelity DNA Polymerase是一种以嗜热古细菌DNA聚合酶为基础通过突变等改造其“尿嘧啶结合口袋”而获得的能识别和扩增含有尿嘧啶（uracil）和次黄嘌呤（hypoxanthine）的模板DNA的超高性能DNA聚合酶，因此它除了具有扩增速度快、保真度极高、扩增片段可以轻松达到12 kb等优点之外，还可以利用dUTP (2'-deoxy-uridine 5'-triphosphate）和dITP (2'-deoxy-inosine-5'-triphosphate）进行基因扩增。

High-Fidelity DNA Polymerase用于二代测序建库相关扩增时，具有扩增效率极高，低GC偏好性（low GC bias）等优良特性，特别适合用于亚硫酸处理的（bisulfite-converted）、脱氨基的(deaminated)或甲醛固定石蜡包埋（formalin fixation and paraffin embedding, FFPE)等导致的损伤的（damaged）DNA样品的扩增，以及PCR扩增时可以掺入dUTP并和尿嘧啶-N-糖基化酶（uracil-N-glycosylase, UNG）处理相结合可以有效避免PCR扩增产物污染导致的假阳性。DNA长期保存会出现随机的Cytocine脱氨基现象，导致普通的DNA聚合酶无法扩增，而本产品可以兼容并扩增脱氨基的DNA。

High-Fidelity DNA Polymerase是一种高保真DNA聚合酶，它不仅可以非常高效地催化5'至3'方向的依赖于DNA模板的聚合酶活性，同时还具有3'至5'的外切酶活性（proofreading activity），它的错误发生概率比Taq酶低40-50倍，其扩增产物为平端（blunt end），因此不能直接进行T载体克隆连接。如需用于T载体克隆，需在其扩增结束后加入常规量的普通Taq酶在72°C反应5-10 min，使每条链的3'端加上一个A以形成粘端。

▍产品应用

常规的DNA高效高保真扩增，特别适用于扩增亚硫酸处理的（bisulfite-converted）DNA样品用于DNA甲基化测序，特别适用于扩增脱氨基的(deaminated）或甲醛固定石蜡包埋（formalin fixation and paraffin embedding, FFPE）等导致的损伤的（damaged）DNA样品的扩增，以及PCR扩增时可以掺入dUTP并和尿嘧啶-N-糖基化酶(uracil-N-glycosylase, UNG）处理相结合，可以有效避免PCR扩增产物污染导致的假阳性。

▍产品保存

-20℃保存，至少两年有效。

▍产品组分

组分编号	组分名称	组分规格
HX1014-1	High-Fidelity DNA Polymerase（2U/µl）	50 µl	250 μl	1 ml
HX1014-2	10X High-Fidelity Buffer	500 µl	2.5 ml	10 ml

▍注意事项

1. PCR反应非常灵敏，在进行PCR扩增反应时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量设置不加模板的空白对照。

2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. 融解并混匀PCR反应所需的各种溶液。PCR反应体系的设置：

	扩增片段小于6 kb		扩增片段大于6 kb
试剂	最终浓度	体积	最终浓度	体积
Nuclease-free water	-	（38.5-x）μl	-	（32.5-y）μl
10X High-Fidelity Buffer	1×	5 μl	1×	5 μl
dNTP（2.5 mM each）	0.25 mM each	5 μl	0.5 mM each	10 μl
模板DNA	10 pg-1 μg	x μl	10 pg-1μg	y μl
引物混合物（10 μM each）	0.2 μM each	1 μl	0.4 μM each	2 μl
High-Fidelity DNA Polymerase	1 U/50μl	0.5μl	1 U/50μl	0.5 μl
总体积	-	50 μl	-	50 μl

2. 推荐的PCR反应程序如下：

步骤	循环数	温度	扩增片段小于6 kb	扩增片段6-25 kb
预变性	1	94ºC	3 min	3 min
变性	30	94ºC	30 sec	30 sec
退火		55ºC	30 sec	30 sec
延伸		68ºC	15 sec/kb	1 min/kb
最终延伸	1	68ºC	10 min	15 min

注：

1. 不同类型的DNA模板的推荐用量有所不同。哺乳动物基因组DNA：100 ng；大肠杆菌基因组DNA：100 ng；质粒DNA：5-30 ng。扩增大于6kb的片段时，模板量宜适当加大，但过多的模板DNA也容易导致非特异性的PCR扩增产物。在推荐用量时相对会非常容易扩增出目的片段，实际应用时如果模板DNA的量比较少，完全可以大大少于推荐的用量的。在扩增大于6 kb的片段时dNTP和引物的用量和扩增小于6 kb片段时相比需要加倍。

2. 用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀，室温离心数秒，使液体积聚集于管底。如果PCR仪没有热盖，则在管内滴入一滴矿物油。

3. 设置好的PCR反应管置于PCR仪上，开始PCR反应。预变性和变性的温度设置为94ºC，延伸温度设置为72ºC，其余条件不变时，都可以进行正常的PCR扩增，但扩增效果会稍有下降。对于较难扩增的序列，推荐使用92ºC变性和72ºC延伸。

4. PCR反应的设置需根据模板、引物、PCR产物的长度和GC含量等条件的不同设定不同的温度、时间和循环数等。延伸时间设置需根据PCR产物的长度进行设置，对于本产品扩增小于6 kb的DNA片段时，推荐每kb产物的延伸时间为15 s。扩增大于6 kb的DNA片段时，推荐每kb产物的延伸时间为1 min。

5. 对于初次进行的PCR，为尽量确保可以扩增出预期的PCR产物，可以把循环数设置为35。对于需进行半定量或定量的PCR反应，循环数一定要进行适当优化，使PCR反应达到预期。

下载产品使用说明书

Q：PCR Mix可以减少体系么？

A：可以，使用的引物、模板等比减少使用。

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