PCR Kit with Hexu Taq（PCR试剂盒，高保真，带A尾）

高保真PCR/PCR Kit with Hexu Taq（PCR试剂盒，高保真，带A尾）

本PCR试剂盒适合用于各种常规PCR以及T载体克隆、点突变等，能在高效扩增DNA模板的情况下同时保证高保真性。扩增产生的PCR产物带有3'-dA overhangs，可以用于基于T载体的PCR片段克隆。

产品货号	产品规格	目录价	促销价
HX1013	400次	217.00	195.00

▍产品信息

本PCR试剂盒带有Hexu Taq DNA Polymerase、PCR buffer、dNTP和上样缓冲液，自备模板和引物即可进行PCR反应，适合用于各种常规PCR以及T载体克隆、点突变等，能在高效扩增DNA模板的情况下同时保证高保真性。

Hexu Taq DNA Polymerase简称Hexu Taq酶，是一种兼顾了高保真性和高扩增效率的DNA聚合酶。可以催化5'至3'方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合。不仅有3'至5'的外切酶活性（proofreading activity），还有5'至3'的外切酶活性，但没有反转录酶的活性。由于拥有3'至5'的外切酶活性，因此在PCR扩增过程中出错的几率大大降低，出错率为1.6×10^-6 per nt per cycle，略低于Pfu酶的2.6×10^-6 per nt per cycle。Hexu Taq酶的DNA扩增效率大大高于Pfu酶，和Taq酶的扩增效率比较接近，很好地兼顾了扩增效率和扩增的准确性。

▍产品应用

高保真PCR（high fidelity PCR）、点突变、T载体克隆等各种常规PCR反应。扩增产生的PCR产物带有3'-dA overhangs，可以用于基于T载体的PCR片段克隆。可以扩增长度达5 kb的DNA片段，最长可以扩增长达10 kb的DNA片段。通常适合扩增3 kb以下的DNA片段。

▍产品保存

-20℃保存。

▍产品组分

组分编号	组分名称	组分规格
HX1013-1	Hexu Taq DNA Polymerase（5 U/μl）	200 U
HX1013-2	10X Hexu Taq Buffer（with Mg²⁺）	1 ml
HX1013-3	dNTP（2.5 mM each）	0.7 ml
HX1013-4	6X DNA Loading Buffer	1 ml×2

▍注意事项

1. 由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用Hexu Taq酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。

2. Hexu Taq酶有3'至5'的外切酶活性，无dNTP时可以降解引物。因此Hexu Taq酶一定要最后加入，并且要在冰浴上操作。不能使用Taq酶的PCR Buffer来替代Hexu Taq酶的PCR Buffer。

3. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. 融解并混匀PCR反应所需的各种溶液。PCR反应体系的设置：

试剂	最终浓度	体积	体积
双蒸水或Milli-Q水	-	（36.75-x）μl	（14.7-y）µl
10X Hexu Taq Buffer（with Mg²⁺）	1 X	5 μl	2 µl
dNTP（2.5 mM each）	0.2 mM each	4 μl	1.6 µl
模板DNA	10 pg-1 μg	X μl	y µl
引物混合物（10 μM each）	0.8 μM	4 μl	1.6 µl
Hexu Taq DNA Polymerase（5 U/μl）	1.25 U/50 μl	0.25 μl	0.1 µl
总体积	-	50 μl	20 µl

2. 推荐的PCR反应程序如下：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	3 min	1
变性	94℃	30 sec	30
退火	55℃	30 sec
延伸	72℃	2 min
最终延伸	72℃	10 min	1

注：

1) 如果有多个类似的PCR反应，可以先配制大体积的包含水、buffer、dNTP和Hexu Taq酶的混合物，然后分装到各PCR反应管内。根据情况，有时混合物中可以包括引物。PCR反应的设置需根据模板、引物、PCR产物的长度和GC含量等条件的不同设定不同的PCR反应条件包括温度、时间和循环数等。

2) 对于不同类型的模板在50 µl反应体积中推荐用量如下：哺乳动物基因组DNA：0.1-1 µg；大肠杆菌基因组DNA：10-100 ng；质粒DNA：0.1-10 ng。过多的模板DNA容易导致非特异性的PCR产物。

3) 反应前用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。如果PCR仪没有热盖，可在管内滴入一滴矿物油。

4) 延伸时间设置需根据PCR产物的长度进行设置，通常每kb产物的延伸时间为1.5 min。对于初次进行的PCR，为尽量确保可以扩增出预期的PCR产物，可以把循环数设置为35。对于需进行半定量或定量的PCR反应循环数一定要进行适当优化，使PCR反应达到预期。

下载产品使用说明书

Q：PCR产物非常少或没有特异性条带是什么原因呢?

A：引物设计不佳是PCR过程中最常见的问题。请选择适当的引物设计软件进行引物设计，注意引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等方面的问题。在加入酶切位点等的引物中，一定要注意加入酶切位点等后整条引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等方面的问题。在原有引物效果不佳的情况并且阳性对照引物可以正常工作的情况下，可以考虑更换引物。

Q：待扩增片段GC含量偏高怎样做？

A：GC含量较高的情况下PCR会变得相对比较困难，此时可以使用适合扩增高GC含量DNA片段的GC-rich buffer，并相应地根据GC-rich buffer的要求或说明调整PCR反应参数的设置。

Q：PCR Mix可以减少体系么？

A：可以，使用的引物、模板等比减少使用。

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