Fusion DNA Polymerase（长片段高保真，平末端）

高保真PCR/Fusion DNA Polymerase（长片段高保真，平末端）

超高性能DNA聚合酶，具有扩增速度快、保真度极高、扩增片段可以轻松达到12 kb等优点。扩增出来的DNA片段为双平端，可以直接用于双平端克隆。

产品货号	产品规格	目录价	促销价
HX1011S	200 U	125.00	112.00
HX1011M	1000 U	509.00	458.00

▍产品信息

Fusion DNA Polymerase，是一种以嗜热古细菌DNA聚合酶（hyperthermophilic archaeon Pyrococcus-like DNA polymerase）为基础通过突变等改造而获得的超高性能DNA聚合酶，具有扩增速度快、保真度极高、扩增片段可以轻松达到12 kb等优点。

Fusion DNA Polymerase扩增速度极快，扩增小于6 kb的DNA片段时，延伸1 kb只需要15 sec。而普通的DNA聚合酶延伸1 kb通常需要1-2 min。由于其超快的扩增速度，可以显著缩短PCR扩增所需的时间。 Fusion DNA Polymerase是一种高保真DNA聚合酶，不仅可以非常高效地催化5'至3'方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合反应，同时还具有3'至5'的外切酶活性（proofreading activity），它的错误发生概率比Taq酶要低52倍，比pfu酶要约低6倍。Fusion DNA Polymerase的扩增长度长，非常适合长片段DNA的扩增，扩增出来的片段可以轻松达到12 kb，更长片段的扩增效果未经测试。Fusion DNA聚合酶可以轻松胜任具有复杂二级结构的、非常长的DNA片段的准确扩增，因此它是目的基因扩增和克隆的理想选择（参考表1）。

表1. Fusion DNA Polymerase的主要性能与Taq酶及同类产品的比较。

Product Name	Concentration	Velocity	Target Size	Fidelity	Product end
Taq	5 U/μl	1 min/kb	<3 kb	2.3×10^-5/nt/cycle	3'overhangs
Pfu	5 U/μl	2 min/kb	<5 kb	2.6×10^-6/nt/cycle	Blunt
Fusion	2.5 U/μl	15-60 sec/kb	>12 kb	4.4×10^-7/nt/cycle	Blunt
Fusion Plus	2.5 U/μl	15-60 sec/kb	>12 kb	2.2×10^-6/nt/cycle	3' overhangs

▍产品应用

高保真PCR（high fidelity PCR）、点突变、PCR克隆等。扩增出来的DNA片段为双平端，可以直接用于双平端克隆，但不能直接用于常规的T载体克隆。如需用于T载体克隆，需在PCR扩增结束后加入常规量的普通Taq酶在72°C反应5-10 min，使每条链的3’端加上一个A以形成粘端。

▍产品保存

-20℃保存。

▍产品组分

组分编号	组分名称	组分规格
HX1011-1	Fusion DNA polymerase（2.5 U/µl）	80 µl	400 μl
HX1011-2	10X Fusion Buffer（with Mg²⁺）	0.5 ml	1.2 ml×2

▍注意事项

1. PCR反应非常灵敏，在进行扩增反应时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照。

2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. 融解并混匀PCR反应所需的各种溶液。PCR反应体系的设置：

	扩增片段小于6 kb		扩增片段大于6 kb
试剂	最终浓度	体积	最终浓度	体积
双蒸水或MilliQ水	-	（38-x）μl	-	（32-y）μl
10X Fusion Buffer（with Mg²⁺）	1×	5 μl	1×	5 μl
dNTP（2.5 mM each）	0.25 mM	5 μl	0.5 mM	10 μl
模板DNA	10 pg-1 μg	x μl	10 pg-1 μg	y μl
引物混合物（10 μM each）	0.2 μM each	1 μl	0.4 μM each	2 μl
Fusion DNA polymerase	2.5 U/50μl	1 μl	2.5 U/50μl	1 μl
总体积	-	50 μl	-	50 μl

2. 推荐的PCR反应程序如下：

步骤	循环数	温度	扩增片段小于6 kb	扩增片段6-25 kb
预变性	1	92ºC	3 min	3 min
变性	30	92ºC	30 sec	30 sec
退火		55ºC	30 sec	30 sec
延伸		68ºC	15 sec/kb	1 min/kb
最终延伸	1	68ºC	10 min	15 min

注：

1. 对于不同类型的模板在50 μl反应体积中推荐用量如下：哺乳动物基因组DNA：100 ng；大肠杆菌基因组DNA：100 ng；质粒DNA：5-30 ng。扩增大于6 kb的片段时，模板量宜适当加大，但过多的模板DNA也容易导致非特异性的PCR产物。

2. 在扩增大于6 kb的片段时dNTP和引物的用量比扩增小于6 kb片段时加倍。

3. 反应前用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。如果PCR仪没有热盖，则在管内滴入一滴矿物油。

4. PCR反应的设置需根据模板、引物、PCR产物的长度和GC含量等条件的不同设定不同的温度、时间和循环数等。预变性和变性的温度设置为94ºC，延伸温度设置为72ºC，其余条件不变时，可以进行正常的PCR扩增，但扩增效果会稍有下降。对于较难扩增的序列，推荐使用92ºC变性和72ºC延伸。延伸时间设置需根据PCR产物的长度进行设置，对于本产品扩增小于6 kb的DNA片段时，推荐每kb产物的延伸时间为15 sec。扩增大于6 kb的DNA片段时，推荐每kb产物的延伸时间为1 min。

5. 对于初次进行的PCR，为尽量确保可以扩增出预期的PCR产物，可以把循环数设置为35。对于需进行半定量或定量的PCR反应，循环数一定要进行适当优化，使PCR反应达到预期。

下载产品使用说明书

Q：PCR产物非常少或没有特异性条带是什么原因呢?

A：引物设计不佳是PCR过程中最常见的问题。请选择适当的引物设计软件进行引物设计，注意引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等方面的问题。在加入酶切位点等的引物中，一定要注意加入酶切位点等后整条引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等方面的问题。在原有引物效果不佳的情况并且阳性对照引物可以正常工作的情况下，可以考虑更换引物。

Q：待扩增片段GC含量偏高怎样做？

A：GC含量较高的情况下PCR会变得相对比较困难，此时可以使用适合扩增高GC含量DNA片段的GC-rich buffer，并相应地根据GC-rich buffer的要求或说明调整PCR反应参数的设置。

Q：PCR Mix可以减少体系么？

A：可以，使用的引物、模板等比减少使用。

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