Pfu DNA Polymerase（高保真，平末端）

高保真PCR/Pfu DNA Polymerase（高保真，平末端）

最常用的高保真DNA聚合酶之一，扩增出来的DNA片段为双平端。

产品货号	产品规格	目录价	促销价
HX1009S	200 U	40.00	36.00
HX1009M	1000 U	159.00	143.00

▍产品信息

Pfu DNA Polymerase简称Pfu酶，是最常用的高保真DNA聚合酶之一。 Pfu DNA Polymerase是一种来源于嗜热菌Pyrococcus furiosus的高度热稳定的DNA聚合酶，分子量为90 kDa，可以催化5'至3'方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合。和Taq酶不同，Pfu酶有3'至5'的外切酶活性(proofreading activity)。另外，Pfu酶有5'至3'外切酶活性，但Pfu酶没有反转录酶活性。由于Pfu酶有3'至5'的外切酶活性，在PCR扩增过程中出错的几率大大降低，出错率为2.6×10^-6 per nt per cycle，因此Pfu酶常作为首选的高性价比的高保真DNA聚合酶。

▍产品应用

高保真PCR（high fidelity PCR）、点突变、双平端PCR克隆等。Pfu酶扩增出来的DNA片段为双平端，可以用于双平端克隆，但不能用于常规的T载体克隆。dUTP和dITP或含有dUTP和dITP的引物不能用于Pfu酶介导的PCR扩增反应。

▍产品保存

-20℃保存。

▍产品组分

组分编号	组分名称	组分规格
HX1009-1	Pfu DNA Polymerase (5 U/μl)	200 U	1000 U
HX1009-2	10X Pfu Buffer (with Mg²⁺)	1 ml	1 ml×5

▍注意事项

1. 由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用Pfu酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。

2. Pfu DNA polymerase在扩增DNA片段时的出错率非常低，但其扩增效率也比较低。对于出错率要求不高的情况，例如RT-PCR进行定量或半定量，推荐使用Taq DNA polymerase。在扩增效率和出错率需要兼顾的情况，可以选择Hexu Taq DNA Polymerase。在扩增2 kb以下DNA片段时，Pfu酶和Taq酶的扩增效率相近。在准确性要求很高的情况下，须选择Pfu酶。

3. Pfu酶有3'至5'的外切酶活性，在没有dNTP的情况下可以降解引物。因此Pfu酶一定要最后加入，并且要在冰浴上操作。不能使用Taq酶的PCR Buffer来替代Pfu酶的PCR Buffer。

4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. 融解并混匀PCR反应所需的各种溶液。PCR反应体系的设置：

试剂	最终浓度	体积
双蒸水或Milli-Q水	-	（36.75-x）μl
10X Pfu Buffer（with Mg²⁺）	1 X	5 μl
dNTP（2.5 mM each）	0.2 mM each	4 μl
模板DNA	10 pg-1 μg	x μl
引物混合物（10 μM each）	0.8 μM	4 μl
Pfu DNA Polymerase（5 U/μl）	1.25 U/50 μl	0.25 μl
总体积	-	50 μl

2. 推荐的PCR反应程序如下：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	3 min	1
变性	94℃	30 sec	30
退火	55℃	30 sec
延伸	72℃	2 min
最终延伸	72℃	10 min	1

注：

1) 对于不同类型的模板在50 μl反应体积中推荐用量如下：哺乳动物基因组DNA：0.1-1 μg；大肠杆菌基因组DNA：10-100 ng；质粒DNA：0.1-10 ng。过多的模板DNA容易导致非特异性的PCR产物。

2) 反应前用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。如果PCR仪没有热盖，则在管内滴入一滴矿物油。

3) PCR反应的设置需根据模板、引物、PCR产物的长度和GC含量等条件的不同设定不同的PCR反应条件包括温度、时间和循环数等。延伸时间设置需根据PCR产物的长度进行设置，通常每kb产物的延伸时间为2 min。

4) 对于初次进行的PCR，为尽量确保可以扩增出预期的PCR产物，可以把循环数设置为35。对于需进行半定量或定量的PCR反应循环数一定要进行适当优化，使PCR反应达到预期。

下载产品使用说明书

Q：PCR产物非常少或没有特异性条带是什么原因呢?

A：引物设计不佳是PCR过程中最常见的问题。请选择适当的引物设计软件进行引物设计，注意引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等方面的问题。在加入酶切位点等的引物中，一定要注意加入酶切位点等后整条引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等方面的问题。在原有引物效果不佳的情况并且阳性对照引物可以正常工作的情况下，可以考虑更换引物。

Q：待扩增片段GC含量偏高怎样做？

A：GC含量较高的情况下PCR会变得相对比较困难，此时可以使用适合扩增高GC含量DNA片段的GC-rich buffer，并相应地根据GC-rich buffer的要求或说明调整PCR反应参数的设置。

Q：PCR Mix可以减少体系么？

A：可以，使用的引物、模板等比减少使用。

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