Extra-long DNA Polymerase（平末端）

长片段PCR/Extra-long DNA Polymerase（平末端）

具有超强、超长扩增能力的高度热稳定的DNA聚合酶，推荐用于5 kb甚至30 kb以上长片段的PCR扩增。

产品货号	产品规格	目录价	促销价
HX1007S	200 U	145.00	130.00
HX1007M	1000 U	522.00	469.00

▍产品信息

Extra-long DNA Polymerase是一种通过基因重组改造而获得的具有超强（4 kb/min）、超长（35 kb）扩增能力的高度热稳定的DNA聚合酶，具有扩增速度极快，保真度极高，短时间内即可轻松实现35 kb λDNA片段扩增等突出优点。Extra-long DNA Polymerase扩增速度极快，推荐用于5 kb甚至30 kb以上长片段的PCR扩增。扩增小于6 kb的DNA片段时，延伸每1 kb只需要15 sec；扩增大于6 kb的DNA片段时，延伸每1 kb也只需要30 sec。由于其超快的扩增速度，因而可以大大缩短超长片段每个PCR循环的扩增时间。本产品也同样适用于短片段的扩增，可以实现超快速的PCR扩增。使用单体酶完成超长片段扩增，不需要任何其它酶或者蛋白、多肽等辅助因子，即可突破单体酶一步完成长片段的扩增。

Extra-long DNA Polymerase是一种高保真DNA聚合酶，不仅可以非常高效地催化5'至3'方向的依赖于DNA模板的脱氧核苷酸的聚合反应，同时还具有3'至5'的外切酶活性（proofreading activity），它的错误发生概率比Taq酶低约100倍，比pfu酶低约9倍。可以轻松胜任具有复杂二级结构的、非常长的DNA片段的准确扩增，因此它是目的基因扩增和克隆的理想选择。

▍产品应用

超长DNA片段的准确高效PCR扩增、常规高保真PCR、点突变、克隆用途的PCR扩增等。Extra-long DNA polymerase扩增出来的DNA片段为双平端，可以直接用于双平端克隆，但不能直接用于常规的T载体克隆。

▍产品保存

-20℃保存。

▍产品组分

组分编号	组分名称	组分规格
HX1007-1	Extra-long DNA polymerase (2.5 U/µl)	80 µl	400 μl
HX1007-2	10X Extra-long PCR Buffer	400 µl	2 ml

▍注意事项

1. PCR反应非常灵敏，在使用Extra-long DNA Polymerase进行PCR扩增反应时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量设置不加模板的空白对照。

2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. 融解并混匀PCR反应所需的各种溶液。PCR反应体系的设置：

	扩增片段小于6 kb		扩增片段大于6 kb
试剂	最终浓度	体积	最终浓度	体积
双蒸水或MilliQ水	-	（36.5-x）μl	-	（42-x-y）μl
10X Extra-long PCR Buffer	1×	5 μl	1×	5 μl
dNTP（2.5 mM each）	0.25 mM	5 μl	0.5-0.75 mM	x μl
模板DNA	10 pg-1 μg	x μl	100-150 ng	y μl
引物混合物（10 μM each）	0.2 μM each	1 μl	0.4 μM each	2 μl
Extra-long DNA polymerase	2.5 U/50μl	1 μl	2.5 U/50μl	1 μl
总体积	-	50 μl	-	50 μl

2. 推荐的PCR反应程序如下：

步骤	循环数	温度	扩增片段小于6 kb	扩增片段6-25 kb	扩增片段大于25 kb
预变性	1	92ºC	3 min	3 min	3 min
变性	25~35	92ºC	30 sec	30 sec	30 sec
退火		55ºC	30 sec	30 sec
延伸		68ºC	15 sec/kb	0.5 min/kb	0.5 min/kb
最终延伸	1	68ºC	10 min	15 min	15 min

注：

1) 对于不同类型模板DNA的推荐用量如下：哺乳动物基因组DNA 100 ng-500 ng；大肠杆菌基因组DNA 100 pg-100 ng；质粒 DNA 1 ng-20 ng。扩增大于25 kb的片段时，模板量宜适当加大，但过多的模板DNA也容易导致非特异性的PCR产物。

2) 反应前用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。如果用的PCR仪没有热盖，则在管内滴入一滴矿物油以防止蒸发。

3) 上面表格中15 sec/kb表示，如果扩增片段是4 kb，那么68ºC的延伸时间为1 min。0.5 min/kb表示如果扩增片段是4 kb，那么68ºC的延伸时间为2 min。对于大于25 kb的长片段PCR，建议采用两步法，将退火/延伸温度合并为68ºC，可显著提高扩增特异性。

4) 预变性和变性的温度设置为94ºC，延伸温度设置为72ºC，其余条件不变时，也可以进行正常的PCR扩增，但扩增效果会稍有下降。对于较难扩增的序列，推荐使用92ºC变性和72ºC延伸。

5) PCR反应的设置需根据模板、引物、PCR产物的长度和GC含量等条件的不同设定不同的变性、退火和延伸的温度和时间以及循环数等。对于初次进行的PCR，为尽量确保可以扩增出预期的PCR产物，可以把循环数设置为35。对于需进行半定量或定量的PCR反应，循环数需要进行适当优化，使PCR反应达到预期。

下载产品使用说明书

Q：PCR产物非常少或没有特异性条带是什么原因呢?

A：引物设计不佳是PCR过程中最常见的问题。请选择适当的引物设计软件进行引物设计，注意引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等方面的问题。在加入酶切位点等的引物中，一定要注意加入酶切位点等后整条引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等方面的问题。在原有引物效果不佳的情况并且阳性对照引物可以正常工作的情况下，可以考虑更换引物。

Q：PCR Mix可以减少体系么？

A：可以，使用的引物、模板等比减少使用。

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