Hot-Start Taq DNA Polymerase

热启动PCR/Hot-Start Taq DNA Polymerase

仅当温度高于45℃时才具有DNA聚合酶活性的Taq DNA Polymerase 与其可逆抑制剂的混合物。

产品货号	产品规格	目录价	促销价
HX1006S	200 U	104.00	93.00
HX1006M	1000 U	415.00	373.00
HX1006L	5000 U	1655.00	1489.00

▍产品信息

Hot-Start Taq DNA Polymerase是一种仅当温度高于45℃时才具有DNA聚合酶活性的Taq DNA Polymerase （简称Taq酶）与其可逆抑制剂的混合物，俗称热启动Taq酶或HS Taq酶。该抑制剂可以可逆性地结合于Taq酶活性位点，当温度低于45℃时，形成非活性的Taq酶和抑制剂的复合物，从而抑制了Taq酶的活性。在常规PCR反应过程中，上述机制使Hot-Start Taq DNA Polymerase仅在加热到45℃或以上时才会有酶活性，当温度升高至45ºC或以上时，Taq酶与其可逆性抑制剂解离，发挥其正常的DNA聚合酶活性，从而确保了小于45℃时不会发生非特异性的DNA聚合反应，有效降低了PCR的非特异性背景，提高了PCR反应的准确性和精确性。使用本产品进行PCR反应时可以在室温操作，并能有效避免室温操作时由于普通Taq酶或其它耐热DNA聚合酶存在活性而导致的非特异性PCR背景。

常规的DNA分离纯化操作，例如PCR纯化试剂盒或DNA凝胶回收试剂盒和乙醇沉淀等操作，都能有效去除本产品中的抑制剂，以避免可能的对于后续反应的干扰。使用时无需额外的高温孵育步骤以释放Taq酶活性作用，最终会导致PCR产物的3'末端会产生3'-dA overhangs，即产生带一个A的3'粘端。

▍产品应用

高背景和有非特异性条带的PCR，高专一性PCR （high-specificity PCR），高灵敏度PCR，生物芯片分析（microarray analysis），常规PCR，克隆PCR、TA克隆等，不建议用于荧光定量PCR (qPCR)。

▍产品保存

-20℃保存。

▍产品组分

组分编号	组分名称	组分规格
HX1006-1	Hot-Start Taq DNA Polymerase (2.5 U/μl)	200 U	1000 U	5000 U
HX1006-2	10X Hot-Start PCR Buffer	1 ml	1 ml×4	10 ml×2

▍注意事项

1. 由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用Hot-Start Taq Polymerase时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。

2. Hot-Start Taq DNA polymerase在PCR过程中每循环的出错几率约为2.2×10^-5，对于大于1 kb的DNA片段的克隆推荐使用出错几率更低的DNA聚合酶，对于普通的PCR或RT-PCR定性检测或定量检测，Hot-Start Taq DNA polymerase是最佳选择。

3. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. 融解并混匀PCR反应所需的各种溶液。PCR反应体系的设置：

试剂	最终浓度	体积
双蒸水或Milli-Q水	-	(36.5-x) μl
10X Hot-Start PCR Buffer	1 X	5 μl
dNTP (2.5 mM each)	0.2 mM each	4 μl
模板DNA	10 pg-1 μg	X μl
引物混合物(10 μM each)	0.8 μM	4 μl
Hot-Start Taq DNA Polymerase (2.5 U/μl)	1.25 U/50 μl	0.5 μl
总体积	-	50 μl

2. 推荐的PCR反应程序如下：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	3 min	1
变性	94℃	30 sec	30
退火	55℃	30 sec
延伸	72℃	1 min
最终延伸	72℃	10 min	1

注：

1) 通常引物的终浓度为0.2 μM时可获得良好的检测效果，也可以根据情况在0.1-1.0 μM范围内调整引物的终浓度。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度。对于不同类型的模板在50 µl反应体积中推荐用量如下：哺乳动物基因组DNA：0.1-1 µg；大肠杆菌基因组DNA：10-100 ng；质粒DNA：0.1-10 ng。过多的模板DNA容易导致非特异性的PCR产物。

2) 反应前用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。如果PCR仪没有热盖，则在管内滴入一滴矿物油。

3) PCR反应的设置需根据模板、引物、PCR产物的长度和GC含量等条件的不同设定不同的PCR反应条件包括温度、时间和循环数等。延伸时间设置需根据PCR产物的长度进行设置，通常每kb产物的延伸时间为1 min。对于初次进行的PCR，为尽量确保可以扩增出预期的PCR产物，可以把循环数设置为35。对于需进行半定量反应循环数一定要进行适当优化，使PCR反应没有达到平台期。

下载产品使用说明书

Q：PCR产物非常少或没有特异性条带是什么原因呢?

A：引物设计不佳是PCR过程中最常见的问题。请选择适当的引物设计软件进行引物设计，注意引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等方面的问题。在加入酶切位点等的引物中，一定要注意加入酶切位点等后整条引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等方面的问题。在原有引物效果不佳的情况并且阳性对照引物可以正常工作的情况下，可以考虑更换引物。

Q：待扩增片段GC含量偏高怎样做？

A：GC含量较高的情况下PCR会变得相对比较困难，此时可以使用适合扩增高GC含量DNA片段的GC-rich buffer，并相应地根据GC-rich buffer的要求或说明调整PCR反应参数的设置。

Q：PCR Mix可以减少体系么？

A：可以，使用的引物、模板等比减少使用。

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