PCR Kit with Taq

常规PCR/PCR Kit with Taq

PCR Kit with Taq

含Taq DNA Polymerase、PCR buffer、dNTP和上样缓冲液的PCR试剂盒，自备模板和引物即可进行PCR反应。

产品货号	产品规格	目录价	促销价
HX1003S	400次	65.00	58.00
HX1003M	2000次	252.00	226.00

▍产品信息

本PCR试剂盒带有Taq DNA Polymerase、PCR buffer、dNTP和上样缓冲液，自备模板和引物即可进行PCR反应，适合用于普通的PCR或RT-PCR定性或定量检测，也可以用于不太长的的DNA片段的克隆。Taq酶没有3'至5'的外切酶活性，有非常低的5'至3'外切酶活性。由于Taq酶没有3'至5'的外切酶活性，因此在DNA聚合过程中相当于核苷酸转移酶的作用。PCR产物的3’端带有一个A碱基，可直接克隆于T载体。

▍产品应用

1. PCR、DNA标记和测序等。可以扩增长度达5 kb的DNA片段，最长可以扩增长达8 kb的DNA片段。通常适合扩增3 kb以下的DNA片段。

2. 用于核酸的标记反应。基于T载体的PCR片段克隆，扩增产生的PCR产物3’端带有一个A碱基。可以用于PCR反应过程中可以掺入生物素、地高辛或一些荧光机团标记的脱氧核苷酸。

3. 用于DNA测序等。

▍产品保存

-20℃保存。

▍产品组分

组分编号	组分名称	组分规格
HX1003-1	Taq DNA Polymerase (5 U/μl)	200 U	1000 U
HX1003-2	10X PCR Buffer (with Mg²⁺)	1 ml	1 ml×4
HX1003-3	dNTP (2.5 mM each)	0.7 ml	0.8 ml×4
HX1003-4	6X DNA Loading Buffer	1 ml	1 ml×2

▍注意事项

1. 避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。

2. Taq DNA polymerase在PCR过程中每循环的出错几率约为2.2×10^-5，对于大于1kb的DNA片段的克隆推荐使用出错几率更低的DNA聚合酶。

3. 对于普通的PCR或RT-PCR定性检测或定量检测，Taq DNA polymerase是最佳选择。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. 融解并混匀PCR反应所需的各种溶液。PCR反应体系的设置：

试剂	最终浓度	体积	体积
双蒸水或Milli-Q水	-	(36.75-x) μl	(14.7-y) µl
10X PCR Buffer (with Mg²⁺)	1 X	5 μl	2 µl
dNTP (2.5 mM each)	0.2 mM each	4 μl	1.6 µl
模板DNA	10 pg-1 μg	X μl	y µl
引物混合物(10 μM each)	0.8 μM	4 μl	1.6 µl
Taq DNA Polymerase (5 U/μl)	1.25 U/50 μl	0.25 μl	0.1 µl
总体积	-	50 μl	20 µl

2. 推荐的PCR反应程序如下：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	3 min	1
变性	94℃	30 sec	30
退火	55℃	30 sec
延伸	72℃	1 min
最终延伸	72℃	10 min	1

注：

1) 如果有多个类似的PCR反应，可以先配制大体积的包含水、buffer、dNTP和Taq酶的混合物，然后分装到各PCR反应管内。根据情况，有时混合物中可以包括引物。PCR反应的设置需根据模板、引物、PCR产物的长度和GC含量等条件的不同设定不同的PCR反应条件包括温度、时间和循环数等。

2) 通常引物的终浓度为0.2 μM时可获得良好的检测效果，也可以根据情况在0.1-1.0 μM范围内调整引物的终浓度。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度。

3) 对于不同类型的模板在50 µl反应体积中推荐用量如下：哺乳动物基因组DNA：0.1-1 µg；大肠杆菌基因组DNA：10-100 ng；质粒DNA：0.1-10 ng。过多的模板DNA容易导致非特异性的PCR产物。

4) 反应前用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。如果PCR仪没有热盖，可在管内滴入一滴矿物油。

5) 延伸时间设置需根据PCR产物的长度进行设置，通常每kb产物的延伸时间为1 min。对于初次进行的PCR，为尽量确保可以扩增出预期的PCR产物，可以把循环数设置为35。

下载产品使用说明书

Q：PCR产物非常少或没有特异性条带是什么原因呢?

A：引物设计不佳是PCR过程中最常见的问题。请选择适当的引物设计软件进行引物设计，注意引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等方面的问题。在加入酶切位点等的引物中，一定要注意加入酶切位点等后整条引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等方面的问题。在原有引物效果不佳的情况并且阳性对照引物可以正常工作的情况下，可以考虑更换引物。

Q：待扩增片段GC含量偏高怎样做？

A：GC含量较高的情况下PCR会变得相对比较困难，此时可以使用适合扩增高GC含量DNA片段的GC-rich buffer，并相应地根据GC-rich buffer的要求或说明调整PCR反应参数的设置。

Q：PCR Mix可以减少体系么？

A：可以，使用的引物、模板等比减少使用。

Q：PCR Mix有没有3’-5’的外切酶活性？PCR Mix扩增产物类型？

A:没有3’-5’的外切酶活性，产物带有3’-A。可用于TA克隆。

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