产品货号 | 产品规格 | 目录价 | 促销价 |
HX1002 | 400次 | 112.00 | 100.00 |
▍产品信息
2X PCR Master Mix中含有2X Taq DNA Polymerase,2X PCR Buffer,2X dNTP,只需加入适量引物、模板和水即可进行PCR扩增。大大简化了PCR操作,操作更加快捷,减少了PCR操作过程中可能导致的污染,PCR的重复性更好。PCR产物的3’端带有一个A碱基,可直接克隆于T载体。
▍产品应用
1. 进行各种常规的PCR扩增,特别适合用于定性和半定量的PCR扩增,以及2 kb以下DNA片段的T载体克隆。可以扩增出长达8kb的片段,但通常更适合用于扩增2 kb以下的DNA片段。
2. 稳定性高,经测试,反复冻融15次后对PCR的扩增效果无显著影响。用于50 μl的PCR反应体系,足够用于160个反应;用于20 μl的PCR反应体系,足够用于400个反应。
▍产品保存
-20℃保存,至少一年有效。
▍产品组分
组分编号 | 组分名称 | 组分规格 |
HX1002 | 2X PCR Master Mix | 1 ml×4 |
▍注意事项
1. 由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍,在使用Taq酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染,并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
2. Taq DNA polymerase在PCR过程中每循环的出错几率约为2.2×10-5,对于大于1 kb的DNA片段的克隆推荐使用出错几率更低的DNA聚合酶,对于普通的PCR或RT-PCR定性检测或定量检测,Taq DNA polymerase是最佳选择。
3. 尽管本产品经过15次反复冻融后仍具有和冻融前几乎相同的PCR扩增效果,但仍宜适当避免反复冻融本产品,多次反复冻融可能使产品性能下降。使用本产品前,一定要完全融化,并上下颠倒轻轻混匀后才能使用,尽量避免起泡。
4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
1. 融解并混匀PCR反应所需的各种溶液。PCR反应体系的设置:
试剂 | 最终浓度 | 体积 | 体积 |
双蒸水或Milli-Q水 | - | (21-x) μl | (8.4-y) μl |
模板DNA | 10 pg-1 μg | x μl | y μl |
引物混合物(10 μM each) | 0.8 μM | 4 μl | 1.6 μl |
2X PCR Master Mix | 1X | 25 μl | 10 μl |
总体积 | - | 50 μl | 20 μl |
2. 推荐的PCR反应程序如下:
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 3 min | 1 |
变性 | 94℃ | 30 sec | 30 |
退火 | 55℃ | 30 sec | |
延伸 | 72℃ | 1 min | |
最终延伸 | 72℃ | 10 min | 1 |
注:
1) 对于不同类型的模板在50 μl反应体积中推荐用量如下:哺乳动物基因组DNA:0.1-1 μg;大肠杆菌基因组DNA:10-100 ng;质粒DNA:0.1-10 ng。过多的模板DNA容易导致非特异性的PCR产物。
2) 反应前用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀,室温离心数秒,使液体积聚于管底。如果PCR仪没有热盖,则在管内滴入一滴矿物油。
3) PCR反应的设置需根据模板、引物、PCR产物的长度和GC含量等条件的不同设定不同的PCR反应条件包括温度、时间和循环数等。延伸时间设置需根据PCR产物的长度进行设置,通常每kb产物的延伸时间为1 min。
4) 对于初次进行的PCR,为尽量确保可以扩增出预期的PCR产物,可以把循环数设置为35。对于需进行半定量或定量的PCR反应循环数一定要进行适当优化,使PCR反应没有达到平台期。
Q:PCR产物非常少或没有特异性条带是什么原因呢?
A:引物设计不佳是PCR过程中最常见的问题。请选择适当的引物设计软件进行引物设计,注意引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等方面的问题。在加入酶切位点等的引物中,一定要注意加入酶切位点等后整条引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等方面的问题。在原有引物效果不佳的情况并且阳性对照引物可以正常工作的情况下,可以考虑更换引物。
Q:待扩增片段GC含量偏高怎样做?
A:GC含量较高的情况下PCR会变得相对比较困难,此时可以使用适合扩增高GC含量DNA片段的GC-rich buffer,并相应地根据GC-rich buffer的要求或说明调整PCR反应参数的设置。
Q:PCR Mix可以减少体系么?
A:可以,使用的引物、模板等比减少使用。
Q:PCR Mix有没有3’-5’的外切酶活性?PCR Mix扩增产物类型?
A:没有3’-5’的外切酶活性,产物带有3’-A。可用于TA克隆。