产品货号 | 产品规格 | 目录价 | 促销价 |
HX2026S | 200 U | 92.00 | 82.00 |
HX2026M | 1000 U | 344.00 | 309.00 |
HX2026L | 5000 U | 1332.00 | 1198.00 |
▍产品信息
Recombinant DNase I-XT (耐盐型, RNase-free),即Recombinant Salt-tolerant Deoxyribonuclease I (RNase-free),简称DNase I-XT或DNase I-ST,中文名称为无RNA酶重组耐盐型脱氧核糖核酸酶I,是一种通过毕赤酵母(Pichia Pastoris)重组表达经蛋白质工程改造的高品质耐盐型DNase I。本产品不含RNase (RNase-free),特别适用于降解体外转录(In Vitro Transcription, IVT)高盐缓冲体系中的DNA模板,去除RNA样品中残留的基因组DNA。
DNase I-XT与DNase I功能相同,可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸,消化产物5'端为磷酸基团,3'端为羟基。镁离子存在条件下,可随机剪切双链DNA的任意位点;二价锰离子存在条件下,可在同一位点剪切DNA双链,形成平末端,或1-2个核苷酸突出的粘末端。本产品活性好,效果佳,DNase I-XT比DNase I具有更高的耐盐性。当盐浓度>50 mM,DNase I的活性受到明显抑制,高盐易导致DNA降解的不彻底。当盐浓度为50-150 mM,DNase I-XT表现出最佳活性,即使盐浓度高达350 mM,DNase I-XT仍能维持约60%的活性。
▍产品应用
降解体外转录(In Vitro Transcription, IVT)高盐缓冲体系中的DNA模板,去除RNA样品中残留的基因组DNA。
▍产品保存
-20℃保存
▍产品组分
组分编号 | 组分名称 | 组分规格 | ||
HX2026-1 | Recombinant DNase I-XT (10 U/μl) | 20 μl | 100 μl | 500 μl |
HX2026-2 | Reaction Buffer (10X) | 200 μl | 1 ml | 5 ml |
▍注意事项
1. 酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上,使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。
2. 本产品为10 U/μl,如需稀释成1 U/μl或其它浓度,可使用Reaction Buffer (1X)或酶储存溶液进行稀释。
3. DNase I-XT配套的Reaction Buffer是优化过的,仅用于DNase I-XT的反应,而不能用于非耐盐型DNase I。
4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
1. 常规RNA样品中DNA的去除:在冰上向无RNA酶的EP管中依次加入下列试剂,37ºC孵育15 min。
试剂 | 体积 |
Ultrapure Water | (9-x) µl |
Reaction Buffer (10X) | 1 µl |
RNA | x µl (1 µg) |
DNase I-XT (1 U/µl) | 1 µl |
注:
1) 如需处理较大量的RNA样品,可以按照比例放大上述反应体系。
2) 上述反应也可以直接加入0.1 µl DNase I-XT (10 U/µl)。
2. 体外转录(In Vitro Transcription, IVT)后模板DNA的去除:向20 µl体外转录反应体系中加入0.2 µl DNase I-XT (10 U/µl)或2 µl DNase I-XT (1 U/µl),37ºC孵育15 min。
注:
在某些情况下,模板DNA完全消化所需的DNase I-XT的量需通过实验进行摸索。
Q:怎样保持酶的稳定性?
A:质量控制:定期检测酶活性(如琼脂糖凝胶验证DNA消化效果)。
避免高温:运输时使用干冰或低温包装。
Q:怎样降低DNase I-XT对下游PCR/测序的干扰?
A:DNase残留抑制PCR或逆转录酶。可以通过加热/EDTA处理或纯化柱去除酶或对照实验:设置“无DNase”对照以排查干扰来源