T3 RNA Polymerase

▍产品信息

T3 RNA Polymerase，即T3 RNA聚合酶，是一种高度特异识别T3启动子序列的DNA依赖的5'→3' RNA聚合酶。T3 RNA Polymerase可以催化单链或双链DNA T3 启动子下游NTP的掺入，合成与T3启动子下游的模板DNA互补的RNA。

特点：T3 RNA Polymerase不仅可以进行常规的RNA合成，还可以识别修饰的NTP，例如生物素标记、地高辛标记、荧光素标记的NTP，可以用于各种标记RNA的合成。同时对于T3启动子有高度的特异性。

▍产品应用

用于RNA合成，合成的RNA可以用于或用作：杂交探针，基因组DNA序列分析，核糖核酸酶保护测定（RNase protection assay），反义RNA合成，作为体外翻译的RNA模板，RNA剪接研究的底物，RNA二级结构和RNA-蛋白质相互作用，核酸扩增分析，siRNA、miRNA等小RNA。

▍产品保存

-20℃保存

▍产品组分

组分编号	组分名称	组分规格
HX2008-1	T3 RNA Polymerase (50 U/µl)	20 µl	100 µl	500 µl	2.0 ml
HX2008-2	10X T3 Transcription Buffer	25 µl	120 µl	600 µl	1.2 ml×2

▍注意事项

1. 酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. RNA合成：

a. DNA模板经限制性核酸内切酶酶切线性化。

b. 酚/氯仿抽提DNA，用乙醇沉淀后，溶于适量的无菌去离子水中。本步骤也可以使用适当的DNA纯化试剂盒直接进行纯化，从而免去了酚氯仿抽提和乙醇沉淀这些步骤。

c. 参考如下表格设置反应体系：

试剂	体积
10X T3 Transcription Buffer	2 µl
NTP Mixture (10 mM each)	4 µl
线性DNA模板	0.2-1 µg
Ribonuclease Inhibitor (40 U/µl)	0.5 µl
T3 RNA Polymerase (50 U/µl)	0.8-2 µl
补充经DEPC处理的去离子水	至20 µl

d. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。

e. 37ºC 孵育1~2 h。

f. 加入2 µl 0.5 M EDTA（pH 8.0）到反应体系中混匀或-20ºC冷却终止反应。

g. 电泳分析转录产物，或通过其他适当方法鉴定转录的效率

注：

1) 转录需在无RNA酶条件下进行。

2) 反应体系需在室温条件下配置，4ºC有亚精胺（spermidine）存在时DNA可发生沉淀。按以上反应条件，每1 µg 模板DNA可合成超过10 µg的RNA。

3) 如果模板DNA的线形化不太完全，会导致转录出比预期长度更长的RNA，同时使预期长度的转录本比例下降。

4) 可根据实际情况按照比例放大或缩小上述反应体系。

2. 放射标记RNA的合成：

a. DNA模板经限制性核酸内切酶酶切线性化。

b. 酚/氯仿抽提DNA，用乙醇沉淀后，溶于适量的无菌去离子水中。本步骤也可以使用适当的DNA纯化试剂盒直接进行纯化，从而免去了酚氯仿抽提和乙醇沉淀这些步骤。

c. 参考如下表格设置反应体系：

试剂	体积
10X T3 Transcription Buffer	2 µl
3 NTP Mixture (10 mM each , without CTP)	1 µl
100 µM CTP	2.4 µl
[α-³²P]-CTP, ~30TBq/mmol (800 Ci/mmol)	1.85 MBq (50 µCi)
线性DNA模板	0.2~1 µg
Ribonuclease Inhibitor (40 U/µl)	0.5 µl
T3 RNA Polymerase (50 U/µl)	1 µl
补充经DEPC处理的去离子水	至20 µl

d. 37ºC孵育1~2 h。

e. -20ºC冷却终止反应。

f. 分析和检测RNA的标记效率。

注：

1) 按以上方法合成的RNA活性一般为3-5 ×10⁸ dpm/µg。

2) 上述标记反应中也可以使用[³²P]、[³⁵S]或[³H]标记的其他NTP。使用其他放射性标记的NTP时，其他的NTP需作相应调整。20 µl反应体系各成分推荐使用剂量分别为：1.85 MBq (50 µCi) 5'-[α-32P]-CTP, ~30 TBq/mmol (800 Ci/mmol)；11.1 MBq (300 µCi) 5'-[α-³⁵S]-UTP, >37 TBq/mmol (>1000 Ci/mmol)；0.925 MBq (25 µCi) 5,6-[³H]-UTP, 1.1-2.2 TBq/mmol (30-60 Ci/mmol)。

3) 放射性标记NTP浓度低于12 µM时，全长转录本合成效率也会下降。

下载产品使用说明书

Q：转录效率低（RNA产量低）怎么办?

A：纯化模板DNA（琼脂糖凝胶电泳验证完整性），确认模板包含完整的T3启动子序列（5'-ATTAACCCTCACTAAAG-3'）。优化反应体系：NTPs（0.5-1 mM）、Mg²⁺（4-8 mM）、pH（7.5-8.0）。分装酶避免反复冻融，储存于-20℃。

Q：RNA产物长度异常什么原因？

A：模板线性化不完全（环状DNA导致连续转录），RNAse污染导致降解，提前终止（二级结构或序列障碍）。

Q：有非特异性转录怎么办？

A：重新设计模板，确保单一启动子，降低酶用量（通常0.5-1 U/μL足够），纯化模板（如酚氯法去除杂蛋白）。

Q：有副产物（如dsRNA或双链）怎么办？

A: 确保模板为单链或单向转录设计或添加RNase III或热变性模板后再转录。

产品货号	产品规格	目录价	促销价
HX2008S	1 KU	148.00	133.00
HX2008M	5 KU	458.00	412.00
HX2008L	25 KU	1609.00	1448.00
HX2008XL	100 KU	5408.00	4867.00