Pyrophosphatase, Inorganic (yeast)

体外转录酶/Pyrophosphatase, Inorganic (yeast)

可用于催化无机焦磷酸盐（Inorganic pyrophosphate, PPi）水解为正磷酸盐（Orthophosphate）的酵母无机焦磷酸酶。

产品货号	产品规格	目录价	促销价
HX2005S	10 U	220.00	198.00
HX2005M	50 U	520.00	468.00
HX2005L	200 U	1298.00	1168.00
HX2005XL	1000 U	4220.00	3798.00

▍产品信息

Pyrophosphatase, Inorganic (yeast)，酵母无机焦磷酸酶，是由PerfectProtein™技术平台通过大肠杆菌表达、纯化获得的可用于催化无机焦磷酸盐（Inorganic pyrophosphate, PPi）水解为正磷酸盐（Orthophosphate）的高品质重组酶。多种代谢反应会产生无机焦磷，Pyrophosphatase, Inorganic (yeast) 可水解无机焦磷酸盐，从而可以避免无机焦磷酸对反应的抑制，促使反应向正向进行，常用于RNA体外转录、DNA复制和扩增如HDA或LAMP等温扩增等产生无机焦磷酸反应体系中促进正向反应，提高反应产物的产量。Pyrophosphatase, Inorganic (yeast) 是一种金属蛋白酶（Metalloprotease）。该酶的活性受二价金属离子的影响，Mg²⁺、Zn²⁺、Co²⁺、Mn²⁺、Ca²⁺均可以提高其催化活性，在Mg²⁺存在的条件下活性最高。

▍产品应用

体外转录反应中，可提高RNA产量；DNA聚合反应中，防止无机焦磷酸盐积累；利用焦磷酸盐测定法进行SNP基因分型的试剂中去除焦磷酸污染。

▍产品保存

-20℃保存

▍产品组分

组分编号	组分名称	组分规格
HX2005-1	Pyrophosphatase, Inorganic (yeast)	100 μl (0.1 U/μl)	500 μl (0.1 U/μl)	200 μl (1 U/μl)	1 ml (1 U/μl)
HX2005-2	10X Reaction Buffer	100 μl	500 μl	-	-
HX2005-3	Storage (Dilution) Buffer	1 ml	5 ml	-	-
HX2005-4	100 mM Na₄P₂O₇	100 μl	100 μl	-	-

▍注意事项

1. 酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. Pyrophosphatase, Inorganic (yeast)在很多反应体系中有反应活性，很多时候可以直接添加到反应体系中即可有效去除反应产生的焦磷酸，促进正向反应的进行并提高反应产物的产量。

注：

保证反应体系中含有适量的镁离子可以确保Pyrophosphatase, Inorganic (yeast) 具有很高的活性。Pyrophosphatase, Inorganic (yeast) 比较理想的反应温度是25ºC，但在16-37ºC均有较好的酶活性。具体在不同反应体系中的用量，需要适当摸索和优化，通常可以在0.05-1 U/ml浓度范围内进行调整。比较理想的反应条件请参考相关文献资料进行。Storage (Dilution) Buffer可以用于Pyrophosphatase, Inorganic (yeast) 的稀释和保存。

2. 焦磷酸盐的水解：

a. 用超纯水将100 mM Na₄P₂O₇稀释至10 mM，并参考下表在冰浴中配制如下反应体系。

Reagent	Control		Sample
Reagent	Volume	Final Concentration	Volume	Final Concentration
Ultrapure Water	89 μl	-	88 μl	-
10X Reaction Buffer	10 μl	1X	10 μl	1X
10 mM Na₄P₂O₇	1 μl	0.1 mM	1 μl	0.1 mM
Pyrophosphatase, Inorganic (yeast) (Diluted)	-	-	1 μl	0.5-2.5 mU/ml
Total volume	100 μl	-	100 μl	-

反应条件：25ºC孵育10 min。（可适当延长孵育时间，提高水解效果）。

b. 用超纯水将5 mM磷酸盐标准品稀释至50 μM，并参考下表将50 μM磷酸盐(Pi)标准品进一步稀释至不同浓度。

Pi (μM)	0	2.5	5	10	20	30	40	50
50 μM Pi (μl)	0	10	20	40	80	120	160	200
Ultrapure Water (μl)	200	190	180	160	120	80	40	0
Total Volume (μl)	200	200	200	200	200	200	200	200

c. 96孔板每孔中加入200 μl不同浓度的磷酸盐标准品或上述步骤a. 的反应产物(100 μl反应液+100 μl水)。

d.使用焦磷酸酶活性检测试剂盒检测磷酸根的生成量。

下载产品使用说明书

Q：底物（PPi）降解不完全怎么办？

A：可能是酶量不足或反应时间过短，也可能是底物浓度过高（超出酶动力学范围）。可以优化酶量（通常0.1-1 U/反应）和反应时间（10-30 min，37℃），调整底物浓度（参考Km值，酵母PPase对PPi的Km约为0.1-0.5 mM）。

Q：怎样保持酶的稳定性？

A：反应温度过高（如>40℃可能导致变性）以及长期储存后聚集或降解都会影响酶的稳定性。可以添加稳定剂（如50%甘油、1 mM DTT），反应在25-37℃进行，避免高温。

Q：器材或试剂被磷酸盐污染怎么办？

A：使用无磷酸盐的缓冲液和耗材（如DEPC水处理），彻底清洗实验器材（稀盐酸浸泡去除磷酸盐残留）。

Recommended product推荐产品