产品货号 | 产品规格 | 目录价 | 促销价 |
HX3047 | 50 T | 175.00 | 157.00 |
▍产品信息
琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(离心柱式)是一种用于从DNA琼脂糖凝胶中回收目的DNA的试剂盒。采用了融胶液,可以使琼脂糖凝胶完全融化。同时采用了一种新型的离子交换柱,在特定条件下,使DNA能在离心过柱的瞬间,结合到DNA纯化柱上,在一定条件下又能将DNA充分洗脱,从而实现DNA的快速纯化。无需酚氯仿抽提,无需酒精沉淀,通常12个样品只需不足20 min即可完成,每个DNA纯化柱可以结合的DNA量的上限约为15 µg,适用于从DNA琼脂糖凝胶电泳后割取的含有目的DNA的凝胶块中快速提取DNA。该目的DNA通常为PCR产物、质粒DNA酶切出来的DNA片段、超螺旋质粒DNA单酶切后的线性化产物和DNA连接产物等。本试剂盒适用于纯化100 bp-10 kb DNA,长至30个碱基的引物均可被完全去除,DNA回收效率通常为60-90%,接近100 bp或10 kb的DNA片段回收效率要略低一些,大于10 kb的DNA回收效率迅速下降,另外如果样品中DNA含量特别低也会导致回收效率下降。纯化所得DNA可直接用于酶切,连接,转化细菌,测序,PCR,杂交等后续操作。
▍产品应用
用于从DNA琼脂糖凝胶中回收目的DNA,纯化所得DNA可直接用于酶切,连接,转化细菌,测序,PCR,杂交等后续操作。
▍产品保存
室温保存,一年有效。
▍产品组分
组分编号 | 组分名称 | 规格 50 T |
HX3047-1 | Buffer P1(融胶液) | 20 ml |
HX3047-2 | Buffer WB(洗涤液,首次使用前加入39 ml无水乙醇) | 26 ml |
HX3047-3 | Buffer EB(洗脱液) | 3 ml |
HX3047-4 | DNA纯化柱及废液收集管 | 50套 |
▍注意事项
1. 本试剂盒所有操作均在室温进行,操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
2. 废液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丢弃。
3. Buffer P1对人体有刺激性,操作时请小心,并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。
4. 首次使用前在Buffer WB中加入39 ml无水乙醇,混匀,并在瓶上做好标记。
5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
1. 切胶回收后,称重,将胶切碎或在离心管内用1 ml枪头捣碎。
2. 加入等体积的Buffer P1(如胶为100 mg,则加100 µl Buffer P1),vortex或颠倒混匀。
3. 50-60ºC水浴加热约10 min至胶全融,期间,需vortex或颠倒混匀3-4次,以加速凝胶融解。如果胶碎片较小,3-5 min即可全融,凝胶碎片较大则需较长时间,胶全融后至少再在50-60ºC水浴加热2 min。如果DNA片段大于5 kb,宜颠倒混匀,Vortex容易导致大片段DNA断裂。
4. 凝胶液置于DNA纯化柱内,室温放置1 min。如果体积较大,DNA纯化柱内容纳不下,可以把部分样品加入到纯化柱内,经离心处理后,再加入剩余的样品继续处理。
5. 最高速(16000 g,约12000-14000 rmp左右)离心1 min,倒弃收集管内的液体。
注:一定要达到16000 g,较低离心速度会导致回收效率下降。
6. 在DNA纯化柱内加入700 µl Buffer WB,室温放置1 min。
7. 最高速离心1 min,洗去杂质。倒弃收集管内的液体。
8. 再加入500 µl Buffer WB,最高速离心1 min,进一步洗去杂质。倒弃收集管内的液体。
9. 最高速再离心1 min,除去残留液体并让残留的乙醇充分挥发。
10. 将DNA纯化柱置于1.5 ml离心管上,加入30 µl Buffer EB至管内柱面上,放置1 min。最高速离心1 min,所得液体即为高纯度DNA。
注:用1.5 ml离心管作为收集管。Buffer EB需要直接加至管内柱面中央,使液体被纯化柱吸收。如果不慎将Buffer EB沾在管壁上,一定要震动管子,使液体滑落到管底,以便被纯化柱吸收。也可以用重蒸水或Milli-Q级纯水替代Buffer EB,但是水的 pH应不小于6.5。如需得到较高浓度的DNA,可以只加20 µl Buffer EB,但产量会略有下降。放置较长时间例如3-5 min,会对提供产量略有帮助。
Q:为什么回收率低(DNA产量低)?
A:凝胶未完全溶解(尤其高浓度琼脂糖或高熔点琼脂糖);DNA片段过小(<100 bp)或过大(>10 kb),与柱膜结合效率低;离心速度或时间不足,DNA未充分结合到柱膜;洗脱液体积过小或未预热(如使用TE或水时未加热至55–60℃)。
Q:为什么会有DNA残留或污染?
A:凝胶未完全溶解,残留琼脂糖堵塞柱子;样品中含蛋白质(如未充分酶解)或RNA(未加RNase A);洗脱液残留乙醇影响下游实验。
Q:为什么下游实验失败(如酶切、测序)?
A:洗脱液pH或EDTA抑制酶活性(如使用TE缓冲液);残留乙醇或盐离子干扰反应。