产品货号 | 产品规格 | 目录价 | 促销价 |
HX3045 | 50 T | 174.00 | 156.00 |
▍产品信息
PCR/DNA纯化试剂盒(离心柱式)是一种用于PCR产物纯化或从多种DNA反应体系中纯化DNA的试剂盒。适用于PCR反应后去除引物、酶、矿物油、甘油、盐等杂质,也适用于酶切、连接、磷酸化、补平或切平、随机引物等反应后的DNA纯化。纯化所得DNA可直接用于酶切、连接、转化细菌、测序、PCR、杂交等后续操作。适用于纯化100 bp-10 kb DNA,长至30个碱基的引物均可被完全去除。采用了一种新型的DNA纯化柱,在特定条件下,使DNA能在离心过柱的瞬间,结合到DNA纯化柱上,在一定条件下又能将DNA充分洗脱,从而实现DNA的快速纯化。无需酚氯仿抽提,无需酒精沉淀,12个样品只需不足15 min即可完成。每个DNA纯化柱可以结合的DNA量的上限约为15 µg,DNA回收效率约为90%。接近100 bp或10 kb的DNA片段回收效率要略低一些,大于10 kb的DNA回收效率迅速下降,另外如果样品中DNA含量特别低也会导致回收效率下降。
▍产品应用
用于PCR产物纯化或从多种DNA反应体系中纯化DNA。适用于PCR反应后去除引物、酶、矿物油、甘油、盐等杂质,也适用于酶切、连接、磷酸化、补平或切平、随机引物等反应后的DNA纯化。纯化所得DNA可直接用于酶切、连接、转化细菌、测序、PCR、杂交等后续操作。
▍产品保存
室温保存,一年有效。
▍产品组分
组分编号 | 组分名称 | 规格 50 T |
HX3045-1 | Buffer P1(DNA纯化结合液) | 20 ml |
HX3045-2 | Buffer WB(洗涤液,首次使用前加入39 ml无水乙醇) | 26 ml |
HX3045-3 | Buffer EB(洗脱液) | 3 ml |
HX3045-4 | DNA纯化柱及废液收集管 | 50套 |
▍注意事项
1. 本试剂盒所有操作均在室温进行,操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
2. 废液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丢弃。
3. Buffer P1对人体有刺激性,操作时请小心,并注意适当防护以避免直接接触人体或吸入体内。
4. 首次使用前在Buffer WB中加入39 ml无水乙醇,混匀,并在瓶上做好标记。
5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
1. 加入等体积的Buffer P1,混匀。例如DNA样品体积为100 µl,则加100 µl Buffer P1。如果等体积混合后体积较大,可以把部分样品加入到纯化柱内,经离心处理后,再加入剩余的样品继续处理。矿物油对于本试剂盒没有干扰。
2. 把与Buffer P1等体积混匀的样品加入到DNA纯化柱内,室温放置1 min。通常室温放置数秒待溶液浸润到纯化柱中即可。
3. 最高速(16,000 g,约12,000-14,000 rmp左右)离心1 min,倒弃收集管内的液体。
注:这一步尽量要达到16,000 g,较低离心速度会导致回收效率下降。
4. 在DNA纯化柱内加入700 µl Buffer WB,室温放置1 min。
5. 最高速离心1 min,洗去杂质。倒弃收集管内的液体。
6. 再加入500 µl Buffer WB,最高速离心1 min,进一步洗去杂质。倒弃收集管内的液体。
7. 最高速再离心1 min,除去残留液体并让残留的乙醇充分挥发。
8. 将DNA纯化柱置于1.5毫升离心管上,加入50 µl Buffer EB至管内柱面上,放置1 min。用1.5 ml离心管作为收集管。Buffer EB需要直接加至管内柱面中央,使液体被纯化柱吸收。如果不慎将Buffer EB沾在管壁上,一定要震动管子,使液体滑落到管底,以便被纯化柱吸收。也可以用重蒸水或Milli-Q级纯水替代Buffer EB,但是水的pH值应不小于6.5。如需得到较高浓度的DNA,可以只加20-30 µl Buffer EB,但产量会略有下降。放置较长时间例如3-5 min,会对提高产量略有帮助。
9. 最高速离心1 min,所得液体即为高纯度DNA。
Q:为什么回收率低(DNA产量低)?
A:样本起始量不足或DNA浓度过低;结合缓冲液未充分混匀;离心柱吸附能力饱和(样本DNA过量);洗脱液pH或体积不当(如pH偏离8.0-9.0,或洗脱液过少);洗脱步骤未加热(建议60-70℃预热洗脱液)。
Q:为什么会有DNA残留或污染?
A:洗脱液未完全离心收集(柱膜有残留);柱子未干燥(乙醇残留抑制下游实验);交叉污染(试剂或离心柱重复使用)。
Q:为什么下游实验失败(如酶切、测序)?
A:乙醇或盐残留抑制酶活性;洗脱液pH不兼容下游实验。