产品货号 | 产品规格 | 目录价 | 促销价 |
HX3044S | 50 T | 264.00 | 237.00 |
HX3044M | 200 T | 839.00 | 755.00 |
▍产品信息
PCR/DNA纯化试剂盒(磁珠法)是一种使用新型核酸纯化介质包被的磁珠,用于稳定、高效、便捷地从PCR产物或多种DNA反应体系中提取纯化DNA的试剂盒。适用于PCR反应后去除引物、酶、矿物油、甘油、盐等杂质,也同样适用于酶切、连接、磷酸化、补平或切平、随机引物等反应后的DNA纯化。所得DNA可直接用于酶切、连接、转化细菌、测序、PCR、杂交等后续操作。
样品中的DNA与磁珠特异性结合,在外界磁场(如磁分离架)的作用下,磁珠与相应溶液可以快速而高效地分离,经洗涤充分除杂质,最后用洗脱液将DNA从磁珠上洗脱下来,即可获得高度纯化的DNA样品。本试剂盒具有效果稳定、纯度好、操作灵活便捷、可纯化DNA片段大小范围广等优点。根据实际状况灵活调节磁珠用量,通常15 min内即可完成纯化。适用于100 bp以上DNA片段的纯化,对达到10 kb片段DNA的纯化也能保持较好的效果,对长至30个碱基的引物可被完全去除,通常回收率达到90%以上,同时也适用于低浓度样品的浓缩。目前DNA纯化的方法主要为柱纯化试剂盒法,该方法通常需要反复离心,或者需要特殊的抽滤装置,柱纯化过程中的纤维切割对大片段DNA回收不太有利。而磁珠法条件温和,整个操作步骤无需繁琐的反复离心或抽滤操作,以简单的磁铁吸附所代替,确保了操作的快速和便捷,和传统的纯化方法相比,操作过程中不涉及酚/氯仿等有毒试剂。
▍产品应用
使用新型核酸纯化介质包被的磁珠,用于稳定、高效、便捷地从PCR产物或多种DNA反应体系中提取纯化DNA,所得DNA可直接用于酶切、连接、转化细菌、测序、PCR、杂交等后续操作。
▍产品保存
室温保存,一年有效。其中Buffer Beads长期不使用时,4ºC保存,可以保存更长时间。
▍产品组分
组分编号 | 组分名称 | 规格 50 T | 规格 200 T |
HX3044-1 | Buffer Beads(磁珠悬浮液) | 1.5 ml | 6 ml |
HX3044-2 | Buffer P1(结合液) | 20 ml | 80 ml |
HX3044-3 | Buffer WB(洗涤液,首次使用前加入39 ml/78 ml×2无水乙醇) | 26 ml | 52 ml×2 |
HX3044-4 | Buffer EB(洗脱液) | 5 ml | 20 ml |
▍注意事项
1. 本产品适用于手工抽提,也可用于工作站或核酸自动提取仪。
2. 需自备无水乙醇和磁分离装置。
3. Buffer Beads磁珠悬液在静置后会发生沉降,使用前一定要涡旋震荡或颠倒数次至充分混匀。磁分离前应适度震荡离心管使磁珠充分分散后再靠近磁场。如果出现磁珠挂壁现象,可以在磁珠聚集后晃动管内液体,使挂壁的磁珠流下。
4. 温度较低时,Buffer P1可能会有沉淀产生。使用前必须检查一遍。如有沉淀,可置37ºC水浴加热溶解,混匀后使用。Buffer P1对人体有一定的刺激性,操作时请小心,并注意适当防护。
5. 首次使用前在每瓶Buffer WB中加入指定量的无水乙醇,混匀,并在瓶上做好标记。
6. 可用去离子水代替洗脱液进行洗脱,但去离子水的pH不应低于6.5,如偏低可用低浓度NaOH溶液调节至7.5-8.5。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
1. 加入等体积的Buffer P1,颠倒混匀。例如DNA样品体积为100 µl,则加100 µl Buffer P1。
2. 根据样品体积,参照下表用量加入Buffer Beads(使用前务必混匀),颠倒混匀后,室温放置3-5 min。将离心管置于磁力架的磁场中,待磁珠完全聚集后,小心吸除残液。
注:磁珠在使用前一定要涡旋或震荡混匀。如有必要,可适当增加磁珠用量,延长结合时间以提高得率。
样品体积 (µl) | Buffer Beads (µl) | Buffer WB (µl) ① | Buffer WB (µl) ② | Buffer EB (µl) |
10-100 | 10 | 250 | 500 | 20-30 |
100-250 | 20 | 500 | 500 | 40-50 |
250-500 | 30 | 750 | 500 | 60-80 |
500-800 | 40 | 1000 | 500 | 80-100 |
3. 参照上表,通常加入250-750 µl Buffer WB,轻柔震荡使磁珠分散开,颠倒两次后将离心管置于磁力架的磁场中,待磁珠完全聚集后,小心吸除残液。
注:如果离心管内盖有磁珠,可按住离心管整体上下颠倒两次,使磁珠被完全吸附,然后弃去上清。Buffer WB用量可随磁珠的用量适当增减。通常Buffer WB用量为Buffer Beads用量的25倍左右,即20 µl Buffer Beads加入500 µl Buffer WB,30 µl磁珠悬浮液加入750 µl Buffer WB。
4. 加入500 µl Buffer WB,重复3的操作,最终尽量吸净残留液体。
5. 将离心管置于37ºC鼓风烘箱5 min,或室温放置5-10 min,确保残留的乙醇等微量液体完全挥发。
6. 参照上表,加入20-100 μl Buffer EB,轻柔震荡使磁珠悬于溶液中,室温孵育3-5 min,其间甩动离心管2-3次。将离心管置于磁场中,待磁珠完全聚集后,小心吸取溶液至新离心管中,置于-20ºC保存,所得溶液即为纯化的DNA样品。
注:Buffer EB的用量可参考步骤2后表格,其用量一般随磁珠用量增加而相应增加,为提高洗脱效率,通常不少于Buffer Beads用量的2倍。为提高样品浓度,也可适当减少Buffer EB用量。约50-55ºC洗脱比室温洗脱效率略高。
Q:为什么得率低(DNA回收量少)?
A:磁珠与DNA结合不充分(缓冲液条件不合适,如PEG或盐浓度不足);样本起始量过低或DNA片段过小(<100 bp);洗涤过程中DNA流失(过度洗涤或乙醇残留)。
Q:为什么会有污染物残留(如引物、盐、蛋白质)?
A:洗涤不彻底、乙醇未完全干燥或磁珠未充分重悬。
Q:为什么DNA洗脱效率低?
A:洗脱液体积过小、洗脱时间不足或磁珠过度干燥。