RNA/DNA/蛋白提取试剂盒

从培养的动物细胞或组织、植物、酵母、细菌或病毒等单个样品中分步分别提取RNA、基因组DNA和蛋白质的试剂盒。

产品货号	产品规格	目录价	促销价
HX3033S	25 T	332.00	298.00
HX3033M	100 T	1065.00	958.00

▍产品信息

RNA/DNA/蛋白提取试剂盒是一种简单、方便、快速地从培养的动物细胞或组织、植物、酵母、细菌或病毒等单个样品中分步分别提取RNA、基因组DNA和蛋白质的试剂盒。特别适合用于比较珍贵的样品，不仅适用于少量样品的提取，还可用于大量不同样品的同时处理，可以实现一个样品同时用于RNA、DNA和蛋白的抽提。操作简单，使用便捷，仅需约1 h即可完成RNA、DNA和蛋白质的提取。基于特殊裂解液多组分分离的原理，分步提取同一个样品的RNA、DNA和蛋白质。在样品中加入裂解液后进行裂解或匀浆，使细胞或组织充分裂解，加入氯仿混匀并离心后分为三层，包括上层无色水相（含RNA），中间相（含DNA和蛋白质）和下层红色有机相（含DNA和蛋白质）。RNA溶于水相中，取出水相后用异丙醇沉淀即可获得纯化的RNA；用无水乙醇沉淀中间相和下层红色有机相的可溶物，可获得纯化的DNA；进一步用异丙醇沉淀有机相，可获得纯化的蛋白质。这些沉淀通过洗涤去除其它杂质成分后可用于后续的实验；采用高品质抽提试剂，提供的特殊裂解液可以有效抑制RNA的降解，保持样品中RNA的完整性，既可用于小量样品（例如5-100 mg组织或20-500万个细胞），也适用于大量样品（例如大于1 g的组织或超过一千万的细胞）。通常，每一百万细胞可抽提得到5-15 μg RNA，每毫克组织可抽提得到1-10 μg RNA。

抽提所得的RNA、DNA和蛋白质纯度高，用途广泛。抽提所得的总RNA无蛋白、DNA污染，溶于DEPC水或不含RNase的超纯水后的A260/280值为1.8-2.0，可直接用于RT-PCR、cDNA克隆、纯化mRNA、Northern blot、Dot blot、体外翻译、以及RNase protection assay等实验，也可以用于基因表达芯片分析、高通量测序等对RNA质量要求较高的实验；抽提所得的DNA适用于Southern杂交、基因组DNA的PCR扩增、基因组DNA的甲基化等修饰分析及基因组DNA文库的构建等实验；提取的蛋白可用于SDS-PAGE、Western blot、免疫沉淀等分析。

▍产品应用

从培养的动物细胞或组织、植物、酵母、细菌或病毒等单个样品中分步分别提取RNA、基因组DNA和蛋白质。

▍产品保存

4℃保存，一年有效。

▍产品组分

组分编号	组分名称	规格 25 T	规格 100 T
HX3033-1	Buffer P1（裂解液）	25 ml	100 ml
HX3033-2	Buffer WB1（洗涤液I，首次使用前需加入44 ml/176 ml无水乙醇）	22 ml	88 ml
HX3033-3	Buffer WB2（洗涤液II）	66 ml	260 ml
HX3033-4	Buffer WB3（洗涤液III，首次使用前需加入112.5 ml/450 ml无水乙醇）	7.5 ml	30 ml
HX3033-5	Buffer EB1（DNA溶解液）	15 ml	60 ml
HX3033-6	Buffer EB2（蛋白溶解液）	5 ml	20 ml

▍注意事项

1. 用户需自备无水异丙醇、氯仿、无水乙醇、DEPC水或超纯水（DNase/RNase-Free，Sterile）。

2. 所有离心管，枪头及相关溶液都必须无RNA酶污染。耐高温器物可150ºC烘烤4 h以去除RNA酶，其它器物去除RNA酶可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后灭菌，烘干。必须戴一次性手套操作，且尽量不要对着RNA样品呼气或说话，以防RNA酶污染。建议戴一次性口罩操作。Buffer P1含有毒物质，避免接触皮肤或吸入。为防止溅入眼睛，请戴防护眼镜或使用透明保护屏。如皮肤接触Buffer P1，请立即用大量去垢剂和水冲洗，如仍有不适，请听取医生意见。

3. 使用冻存的细胞或组织抽提总RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品。如果不能及时抽提RNA，推荐先加入适量Buffer P1，并裂解样品后冻存。

4. 首次使用前Buffer WB1需添加44 ml/176 ml无水乙醇，Buffer WB3需添加112.5 ml/450 ml无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。

5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. 准备工作：

Buffer WB1、Buffer WB3第一次使用前需分别加入相应的无水乙醇。

2. 样品的裂解：

a. 细胞裂解或组织匀浆。

(a) 贴壁细胞：吸尽培养液，每10 cm²细胞加入1ml Buffer P1。一般6孔板每孔加1 ml Buffer P1，12孔板每孔加0.5 ml Buffer P1。晃动3-5下，再用枪吹打2-3下，确保全部裂解，然后吸至离心管中。

(b) 悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，每500-1000万动植物或酵母细胞，或1000万细菌，加入1 ml Buffer P1。用枪吹打或适当Vortex，确保全部裂解。

注：某些酵母和细菌如裂解不充分，可用匀浆器匀浆，以确保全部裂解。

(c) 组织：先将组织剪切成小块，放入普通玻璃匀浆器内。每50-80 mg组织加入1 ml Buffer P1，匀浆。对于RNA完整性要求比较高的情况，推荐先液氮冷冻组织块，然后在低温下用研钵研碎组织，随后再加入Buffer P1进行总RNA抽提。

b. 对于某些蛋白，多糖或脂含量很高的细胞或组织，Buffer P1裂解后可能会有不溶物或油脂状漂浮物。需12,000×g在4ºC离心10 min，然后吸取澄清的Buffer P1裂解产物至一新的离心管中。

c. 室温孵育5 min，使样品充分裂解。

d. 按每毫升Buffer P1加入0.2 ml氯仿，Vortex混匀或猛烈晃动15 sec，室温孵育2-3 min。

e. 12,000×g在4ºC离心15 min。此时可见分层，分别为无色水相（上层），中间层和红色有机相（下层）。其中上层无色水相用于RNA的提取（步骤3），中间层和下层红色有机相分别用于DNA和蛋白质的提取（步骤4、5）。

3. RNA的提取：

a. 吸取含总RNA的上层无色水相至一新的离心管中，每毫升最初的Buffer P1约可吸取0.5-0.55 ml。

注：不要吸到中间层和红色有机相（下层）。如果要分离DNA和蛋白质可保留这两部分，4ºC可存放过夜。

b. 按每毫升最初的Buffer P1加入0.5 ml无水异丙醇，颠倒数次混匀，室温沉淀10 min。如果希望提取micro RNA等小RNA，推荐-80ºC沉淀过夜。

c. 12,000×g在4ºC离心10 min，在管底可见RNA沉淀，弃上清。

d. 每毫升最初的Buffer P1加入1 ml Buffer WB1，Vortex或颠倒混匀。

e. 7,500×g在4ºC离心5 min，弃上清。再用离心机瞬时离心（>5,000×g），小心吸尽液体。

f. 待RNA略干后，加入20-50 μl DEPC水或超纯水（DNase/RNase-Free，Sterile）溶解，-80ºC冻存。

注：切勿让RNA过分干燥，否则将极难溶解，且测出的A260/280值会低于1.6。

4. DNA的提取：

a. 接RNA提取步骤3a，尽可能去除上层的水相后，保留中间相和红色有机相（下层）。

b. 按每毫升最初的Buffer P1加入0.3 ml无水乙醇，颠倒数次混匀。室温孵育2-3 min。

c. 2,000×g在4ºC离心5 min以沉淀DNA。如果需提取蛋白质，吸取上清至一新的离心管中，-80ºC可存放1-2个月，操作步骤见步骤5。

d. 吸除上清后，用Buffer WB2洗涤DNA沉淀，每毫升最初的Buffer P1加入0.8 ml Buffer WB2。室温孵育30 min，期间轻柔颠倒混匀2-3次。

注：DNA在Buffer WB2中2 h内稳定。

e. 2,000×g在4ºC离心5 min，弃上清。

f. 重复步骤4d-e步骤一次。

注：对于>200 μg的DNA，步骤4d-e须重复两次，即共计3次。

g. 按每毫升最初的Buffer P1加入1.5 ml Buffer WB1洗涤DNA沉淀，室温孵育10-20 min，期间轻柔颠倒混匀2-3次。

注：加入Buffer WB1的DNA沉淀在4ºC可存放1-2个月。

h. 2,000×g在4ºC离心5 min，弃上清。

i. 室温放置晾干DNA沉淀5-15 min，无明显液体后，加入适量Buffer EB1溶解。可60ºC温浴或适当增加DNA溶解液的量以促进DNA溶解。

注：

1) 从50-70 mg组织或者10⁷个细胞中分离的DNA沉淀溶于300-600 μl DNA溶解液，DNA的浓度通常为0.2-0.3 μg/μl。

2) 提取的DNA沉淀可能不易溶于水和中性Tris缓冲液中。

3) 从某些样品（尤其是组织）中提取的DNA中可能包含一些胶状的不溶物，可12,000×g在4ºC离心10 min去除。

5. 蛋白的提取：

a. 接DNA提取步骤4c，取沉淀DNA后的上清。

b. 每毫升最初的Buffer P1加入1.5 ml无水异丙醇，室温孵育10 min。

c. 12,000×g在4ºC离心10 min，弃上清。

d. 用Buffer WB3洗涤蛋白质沉淀。每毫升最初的Buffer P1加入1 ml Buffer WB3，室温孵育20 min。蛋白质在Buffer WB3中，4ºC可保存一个月，-20ºC可保存一年。

e. 7500×g在4ºC离心5 min，弃上清。

f. 重复步骤5d-e 2-3次。

g. 按每毫升最初的Buffer P1加入1.5-2 ml无水乙醇，Vortex混匀。室温孵育20 min。

h. 7500×g在4ºC离心5 min，弃上清。

i. 室温放置晾干蛋白质沉淀5-10 min，用200 μl Buffer EB2溶解蛋白质，反复吸打，可用50ºC温浴使其完全溶解。

j. 10,000×g在4ºC离心10 min去除不溶物。分离得到的蛋白质样品可用于下游实验或-20ºC保存备用。

下载产品使用说明书

Q：为什么提取的RNA降解？

A：提取的RNA沉淀没有完全溶解；获取组织后，未立即处理或进行冷冻；细胞可能被胰蛋白酶过度消化；耗材或操作环境中可能含RNase等。

Q：为什么提取RNA时会有DNA污染？

A：用于样品均质化的裂解液过少；样品可能含有有机溶剂（乙醇、DMSO）、强缓冲液或碱性溶液等。

Q：为什么DNA完全或部分降解？

A：获取组织后，未立即处理或进行冷冻；样品提取前储存于-20℃，而不是-80℃等。

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