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RNA提取/Trizol
Trizol
Trizol
Trizol
用于细胞或组织总RNA及部分植物组织RNA抽提的试剂。


产品货号

产品规格

目录价

促销价

HX3027

100ml

278.00

250.00


产品信息

本产品在经典配方的基础上进行升级,用于细胞或组织总RNA抽提的试剂。能很好提取动物细胞或组织及细菌的总RNA,但对植物组织RNA的提取有选择性。模式植物(拟南芥,小麦,烟草,玉米,大豆)能提取较好的 RNA。一些多糖多酚含量高的植物(西红柿,银杏,梧桐,毛白杨,棉花等)叶片不能提取RNA。可以抽提长达15 kb的RNA,也可以抽提micro RNA等小RNA,抽提小RNA 时宜-70℃沉淀过夜。抽提所得RNA无DNA和蛋白污染。每一百万细胞约可得5-15 µg RNA;每毫克组织约可得1-10 µg RNA,产量因细胞和组织不同而异。抽提所得RNA可直接用于Northern,点杂交,纯化mRNA,体外翻译,RNase protein assay,cDNA 克隆以及 RT-PCR,也可用于基因表达芯片分析,高通量测序等对RNA质量要求较高的情况。


产品应用

用于细胞或组织总RNA抽提的试剂。能很好提取动物细胞或组织及细菌的总RNA,但对植物组织RNA的提取有选择性,模式植物(拟南芥,小麦,烟草,玉米,大豆)能提取较好的 RNA,一些多糖多酚含量高的植物(西红柿,银杏,梧桐,毛白杨,棉花等)叶片不能提取RNA。


产品保存

4ºC保存,一年有效。


产品组分

组分编号

组分名称

规格

HX3027

Trizol试剂

100 ml


注意事项

1. 需自备氯仿(或使用氯仿替代物),异丙醇,DEPC水,75%乙醇(DEPC水配制)。

2. 所有离心管,枪头及相关溶液都必须无RNA酶污染。耐高温器物可150℃烘烤4 h以去除RNA酶,其它器物去除RNA酶可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜,然后灭菌,烘干。溶液需用DEPC水配制。

3. 使用冻存的细胞或组织抽提总RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品。如果不能及时抽提RNA,推荐先加入适量Trizol,并裂解样品后冻存。必须戴一次性手套操作,且尽量不要对着RNA样品说话,以防RNA酶污染。

4. Trizol含有毒物质苯酚,避免接触皮肤或吸入。为防止溅入眼睛,请戴防护眼镜或使用透明保护屏。如皮肤接触Trizol,请立即用大量去垢剂和水冲洗,如仍有不适,请听取医生意见。

5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. 细胞裂解或组织匀浆。

a. 贴壁细胞:吸尽培养液,每10 cm2细胞加入1 ml Trizol。一般六孔板每孔加1 ml Trizol,12孔板每孔加0.5 ml Trizol。晃动3-5下,再用枪吹打2-3下,确保全部裂解,然后吸至离心管中。

b. 悬浮细胞:离心收集细胞,吸尽液体,每五百万至一千万动植物或酵母细胞,或一千万细菌,加入1 ml Trizol。用枪吹打或适当vortex,确保全部裂解。某些酵母和细菌如裂解不充分,可用匀浆器匀浆,确保全部裂解。

c. 组织:先将组织剪切成小块,放入普通玻璃匀浆器内。每50 mg-80 mg组织加入1 ml Trizol,匀浆。对于RNA完整性要求比较高的情况,推荐先液氮冷冻组织块,然后在低温下用研钵研碎组织,随后再加入Trizol进行总RNA抽提。

2. 对于某些蛋白,多糖或脂含量很高的细胞或组织,Trizol裂解后可能会有不溶物或油脂状漂浮物。需12,000g 4ºC离心10 min,然后吸取澄清的Trizol裂解产物至一新的离心管中。

3. 室温放置5 min,使样品充分裂解。

4. 每毫升Trizol加入0.2 ml氯仿,vortex混匀或猛烈晃动15 sec,室温放置2-3 min。

5. 12,000g 4ºC离心15 min,然后吸取含总RNA的上层无色水相至一新的离心管中,每毫升Trizol约可吸取0.5-0.55 ml。

6. 按每毫升最初的Trizol加入0.5 ml异丙醇,颠倒数次混匀,室温沉淀10 min。如果希望提取micro RNA等小RNA,推荐-70ºC沉淀过夜。

7. 12,000g 4ºC离心10 min,在管底可见RNA沉淀,弃上清。

8. 每毫升最初的Trizol加入1 ml 75%乙醇(DEPC水配制),vortex或颠倒混匀。

9. 7500 g 4ºC离心5 min,弃上清。再用离心机甩一下(>5,000 rpm, 离心1 sec),小心吸尽液体。

10. 待RNA略干后,加入20 µl DEPC水溶解,-70ºC冻存。

注:切勿让RNA过分干燥,否则将极难溶解,且测出的A260/280值会低于1.6。

Q:为什么RNA降解?

A:RNase(核糖核酸酶)污染:操作环境/器具污染。

样本处理不当:组织研磨不充分,样本量过大,裂解后未及时处理。

实验过程中温度控制不佳

Q:为什么RNA得率低?

A:样本本身问题;分相不完全;吸取上清时操作失误;RNA沉淀不完全;洗涤步骤残留乙醇未完全去除


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