产品货号 | 产品规格 | 目录价 | 促销价 |
HX3024S | 12 T | 155.00 | 139.00 |
HX3024M | 50 T | 520.00 | 468.00 |
HX3024L | 200 T | 1776.00 | 1598.00 |
▍产品信息
血液RNA提取试剂盒(离心柱式,>200nt)是一种基于离心柱法从血液中安全、快速、便捷、稳定、高效、高质量地提取长度大于200个核苷酸(Nucleotide, nt)的RNA的试剂盒,提取获得的大于200个核苷酸的RNA(也常被称为总RNA)可以用于各种常规用途。可用于反转录、RT-PCR、qPCR、Northern、点杂交、纯化mRNA、体外翻译、RNase protection assay、cDNA克隆等下游实验;也可用于基因表达芯片分析、高通量测序等对RNA质量要求较高的情况。RNA按照长度可以分为长链RNA (Long RNA)和小RNA (Small RNA),长链RNA通常大于200nt,而小RNA通常小于200nt。长链RNA按照是否编码蛋白或多肽可以分为长链非编码RNA (Long noncoding RNA, lncRNA)和mRNA。小RNA主要包括非编码的5.8S rRNA、5S rRNA、tRNA、microRNA、siRNA、piRNA、tsRNA、srRNA等。样品在裂解液中迅速裂解,释放出总RNA,然后让RNA特异性地结合到纯化柱上,而基因组DNA和蛋白质等其它组分通过高速离心被有效去除,再通过3次洗涤充分去除非特异性结合的蛋白、盐等杂质,最后用洗脱液将高纯度的RNA洗脱下来。本试剂盒使用安全,通过特殊的柱纯化介质进行RNA分离纯化,能有效避免传统的TRIzol LS法抽提时使用的酚、氯仿等有毒有害有机试剂;使用快速、便捷,无需使用红细胞裂解液去除无核的红细胞,避免RNA降解,采用柱纯化,无需繁琐的RNA沉淀步骤,提取操作过程仅15-20 min。相比于传统的TRIzol LS抽提法,操作流程显著简化,缩短了提取时间,降低了RNA被降解的风险;提取得到的RNA得率高、纯度高,纯的RNA其A260/A280约为2.0,但在很多仪器上测定时会高于2.0,低于1.9通常认为有蛋白、DNA或者酚等的污染;纯的RNA其A260/A230约为2.0左右或者略高,低于1.9通常认为有碳水化合物、胍盐、多肽或酚等的污染。本试剂盒效果经反复测试,提取得到的RNA的A260/A280通常为2.0-2.2,A260/A230通常为1.9-2.1。本产品适用于纯化200 nt以上的RNA,对小于200 nt的small RNA即小RNA (如5.8S rRNA、5S rRNA、tRNA、miRNA、piRNA等)被选择性地去除。本试剂盒适用于新鲜、冻存、经EDTA、肝素等抗凝处理或经过血液RNA稳定保存液保存的血液RNA的抽提,推荐的血液样品量为200 μl。
▍产品应用
基于离心柱法从血液中安全、快速、便捷、稳定、高效、高质量地提取长度大于200个核苷酸(Nucleotide, nt)的RNA,提取得到的RNA可用于反转录、RT-PCR、qPCR、Northern、点杂交、纯化mRNA、体外翻译、RNase protection assay、cDNA克隆等下游实验;也可用于基因表达芯片分析、高通量测序等对RNA质量要求较高的情况。
▍产品保存
室温保存,一年有效。
▍产品组分
组分编号 | 组分名称 | 规格 12 T | 规格 50 T | 规格 200 T |
HX3024-1 | Buffer P1(裂解液) | 8 ml | 32 ml | 125 ml |
HX3024-2 | Buffer P2(结合液) | 8 ml | 32 ml | 125 ml |
HX3024-3 | Buffer WB1(洗涤液I) | 8 ml | 32 ml | 125 ml |
HX3024-4 | Buffer WB2(洗涤液II) | 15 ml | 63 ml | 125 ml×2 |
HX3024-5 | Buffer EB(洗脱液) | 1.2 ml | 5 ml | 15 ml |
HX3024-6 | RNA纯化柱及废液收集管 | 12套 | 50套 | 200套 |
HX3024-7 | RNA洗脱管 | 12个 | 50个 | 200个 |
▍注意事项
1. 血液样品推荐使用血液RNA稳定保存液进行保存以保持RNA的完整性。
2. 通过本试剂盒抽提得到的RNA已经去除绝大多数DNA,通常情况无需DNase处理。后续如进行某些对DNA残留较敏感的实验时,可以在使用说明中步骤4离心后,在纯化柱中加入适量DNase I进行消化,具体请参考使用说明。本试剂盒提供的所有试剂和耗材都是RNase-free,操作时应小心,避免被污染。所有自行准备的试剂和耗材也都应是RNase-free。如果可能有RNase污染,可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜,然后高温高压灭菌并烘干。操作时应避免对着样品或所使用的试剂盒耗材呼气或说话,以防RNase污染。建议戴一次性口罩操作。
3. 所有操作均在室温进行,操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
4. 废液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丢弃。
5. Buffer P2、Buffer WB1、Buffer WB2中含有乙醇,使用后须旋紧瓶盖以防挥发,并须按照易燃试剂的相关规范进行存放和使用。
6. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
1. 按照1:3的比例在血液样品中加入Buffer P1,例如200 µl的血液样品中加入600 µl的Buffer P1,轻轻吹打5-10次。
注:保存在血液RNA稳定保存液中的血液样品,请参考血液RNA稳定保存液的使用说明步骤1、2对血液样品进行处理。
2. 加入等体积Buffer P2至裂解产物中,轻轻颠倒混匀3-5次。此时可能会有沉淀物产生,属于正常现象。
3. 将混合物(包括沉淀物)转移至纯化柱内,12,000×g离心30 sec,倒弃收集管内液体。
注:当裂解产物的体积大于300 µl时,在加入等体积Buffer P2后,总体积会超过纯化柱的容量,这时应分成两次过柱,即将一半的混合物过柱后,再将剩余的混合物重复步骤3一次。
4. 加入600 µl Buffer WB1,12,000×g离心30 sec,倒弃收集管内液体。
5. 选做:通过本试剂盒抽提得到的RNA已经去除绝大多数DNA,通常情况无需DNase处理。后续如进行某些对DNA残留较敏感的实验时,可在本步骤离心后,在纯化柱中加入80 µl含10 U DNase I的酶溶液(每80 µl酶溶液按照71.8 µl水加8 µl 10X Reaction Buffer再加0.2 µl 50 U/μl DNase I混合配制而成),室温放置消化15 min。消化结束后,不需要进行离心等任何额外的操作,直接进入步骤5。
6. 加入600 µl Buffer WB2,12,000×g离心30 sec,倒弃收集管内液体。
7. 重复步骤6一次。
8. 最高速(约14,000-16,000×g)离心2 min,去除残留的液体。
9. 将RNA纯化柱置于RNA洗脱管中,加入30-50 µl Buffer EB,室温放置2-3 min,最高速离心30 sec,所得溶液即为纯化的RNA。抽提得到的RNA的A260/A280通常为2.0-2.2,A260/A230通常为1.9-2.1。
注:Buffer EB需要加到纯化柱柱面中央,使其被完全吸收。如需获得更高浓度的样品,可把Buffer EB的体积减小至20 µl,但洗脱下来的RNA量会相对减少。室温较低时,Buffer EB在37ºC预热片刻对得率有所帮助。此外,洗脱后的溶液再次加回到原纯化柱再离心洗脱一次,可提高得率约10-30%;或者在第一次洗脱后使用新的Buffer EB再洗脱一次,会获得约为第一次洗脱量15-40%的RNA。
Q:为什么RNA得率低?
A:样本质量或量不足;红细胞裂解不彻底;裂解/结合效率低;RNA未完全洗脱;基因组DNA污染等。
Q:为什么RNA纯度差(A260/A280或A260/A230比值异常)?
A:蛋白质污染(A260/A280 < 1.8);有机试剂或盐离子污染(A260/A230 < 2.0);gDNA污染等。