产品货号 | 产品规格 | 目录价 | 促销价 |
HX3023S | 10 T | 165.00 | 148.00 |
HX3023M | 50 T | 665.00 | 598.00 |
HX3023L | 200 T | 2222.00 | 1999.00 |
▍产品信息
血液总RNA提取试剂盒(磁珠法)是一种使用新型核酸纯化介质包被的磁珠,从血液中安全、快速、便捷、稳定、高效、高质量地提取总RNA的试剂盒,提取获得的RNA包含大分子量RNA和小RNA(<200 nt),也常被称为总RNA(Total RNA),可以用于各种常规分子生物学和生化检测等用途。提取得到的RNA可用于反转录、RT-PCR、qPCR、Northern、点杂交、纯化mRNA、体外翻译、RNase protection assay、cDNA克隆等下游实验;也可用于基因表达芯片分析、高通量测序等对RNA质量要求较高的情况。RNA按照长度可以分为长链RNA(Long RNA)和小RNA(Small RNA),长链RNA通常大于200 nt,而小RNA通常小于200 nt。长链RNA按照是否编码蛋白或多肽可以分为长链非编码RNA(Long noncoding RNA, lncRNA)和mRNA。小RNA主要包括非编码的5.8S rRNA、5S rRNA、tRNA、microRNA、siRNA、piRNA、tsRNA、srRNA等。样品在裂解液中迅速裂解,释放出总RNA,然后让RNA特异性地结合到磁珠上,再通过3次洗涤充分去除非特异性结合的蛋白、盐等杂质,最后用洗脱液将高纯度的RNA洗脱下来。
本试剂盒使用安全,通过特殊的磁珠纯化介质进行RNA分离纯化,能有效避免传统的TRIzol LS法抽提时使用的酚、氯仿等有毒有害有机试剂;使用快速、便捷,无需使用红细胞裂解液去除无核的红细胞,避免RNA降解,采用磁珠纯化,无需繁琐的RNA沉淀步骤,提取操作过程仅15-20 min。相比于传统的TRIzol LS抽提法,本试剂盒的操作流程显著简化,缩短了提取时间,降低了RNA被降解的风险;本试剂盒抽提得到的RNA得率高、纯度高。纯的RNA其A260/A280约为2.0,但在很多仪器上测定时会高于2.0,低于1.9通常认为有蛋白、DNA或者酚等的污染;纯的RNA其A260/A230约为2.0左右或者略高,低于1.9通常认为有碳水化合物、胍盐、多肽或酚等的污染。本试剂盒效果经反复测试,提取得到的RNA的A260/A280通常为2.0-2.2,A260/A230通常为1.9-2.1。适用于新鲜、冻存、经EDTA、肝素等抗凝处理或经过血液RNA稳定保存液保存的血液RNA的抽提,推荐的血液样品量为100-200 μl。
▍产品应用
使用新型核酸纯化介质包被的磁珠,从血液中安全、快速、便捷、稳定、高效、高质量地提取总RNA,提取得到的RNA可用于反转录、RT-PCR、qPCR、Northern、点杂交、纯化mRNA、体外翻译、RNase protection assay、cDNA克隆等下游实验;也可用于基因表达芯片分析、高通量测序等对RNA质量要求较高的情况。
▍产品保存
除DNase和Reaction Buffer(10X)以外,室温保存,一年有效。DNase和Reaction Buffer(10X) -20ºC保存,一年有效。其中Buffer Beads长期不使用时,4ºC保存,可以保存更长时间。
▍产品组分
组分编号 | 组分名称 | 规格 10 T | 规格 50 T | 规格 200 T |
HX3023-1 | Buffer Beads(RNA磁珠悬浮液) | 0.2 ml | 1 ml | 4 ml |
HX3023-2 | Buffer P1(裂解液) | 6 ml | 30 ml | 120 ml |
HX3023-3 | Buffer P2(结合液,首次使用前加 3.5 ml /17.5 ml/70 ml无水乙醇) | 2.5 ml | 12.5 ml | 50 ml |
HX3023-4 | Buffer WB1(洗涤液I) | 6 ml | 32 ml | 125 ml |
HX3023-5 | Buffer WB2(洗涤液II,首次使用前加 3.5 ml /17.5 ml/70 ml无水乙醇) | 3.6 ml | 18 ml | 36 ml×2 |
HX3023-6 | Buffer EB(洗脱液) | 1 ml | 5 ml | 20 ml |
HX3023-7 | DNase | 20 μl | 100 μl | 400 μl |
HX3023-8 | Reaction Buffer(10X) | 100 µl | 500 µl | 2 ml |
▍注意事项
1. 血液样品推荐使用血液RNA稳定保存液进行保存以保持RNA的完整性。
2. 本试剂盒抽提得到的RNA会含有少量的DNA,通常情况无需DNase处理。后续如进行某些对DNA残留较敏感的实验时,需要在使用说明中步骤4后,在磁珠中加入适量DNase进行消化,具体请参考使用说明。建议使用推荐的血液量用于RNA的抽提,否则可能导致RNA磁珠聚集而使基因组DNA消化不充分。如果基因组DNA消化不充分,可以加大DNase的用量或延长孵育时间。
3. 本试剂盒提供的所有试剂和耗材都是RNase-free,操作时应小心,避免被污染。所有自行准备的试剂和耗材也都应是RNase-free。如果可能有RNase污染,可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜,然后高温高压灭菌并烘干。操作时应避免对着样品或所使用的试剂盒耗材呼气或说话,以防RNase污染。建议戴一次性口罩操作。
4. 本试剂盒所有操作均在室温进行,操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。废液收集管在一次抽提中需多次使用,切勿中途丢弃。
5. 需自备磁分离装置。
6. 首次使用前,Buffer P2和Buffer WB2按照说明书或瓶标上的指示加入相应量的无水乙醇,混匀,并在瓶上做好标记。
7. Buffer P2、Buffer WB1、Buffer WB2中含有乙醇,使用后须旋紧瓶盖以防挥发,并须按照易燃试剂的相关规范进行存放和使用。
8. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
1. 取100-200 µl血液(其中红细胞不含RNA)或5-10 µl血液(其中红细胞含RNA)10,000×g 离心5 min,收集细胞沉淀,按照1:3的比例在血液样品中加入Buffer P1,例如200 µl的血液样品中加入600 µl的Buffer P1,轻轻吹打5-10次。
注:白细胞的收集和保存在血液RNA稳定保存液中的血液样品,请参考血液RNA稳定保存液的使用说明步骤1、2对血液样品进行处理。人、猴、牛、兔、大鼠、小鼠等的红细胞无细胞核,鸟、鱼、蛙等的红细胞有细胞核。红细胞有细胞核会导致相同体积的血液内DNA的含量非常高。
2. 加入等体积Buffer P2至裂解产物中,轻轻颠倒混匀3-5次。此时可能会有沉淀物产生,属于正常现象。
3. 将混合物(包括沉淀物)转移至的1.5 ml离心管内,加入20 µl Buffer Beads (使用前务必混匀),轻柔混匀后,室温放置3-5 min。将离心管置于磁力架的磁场中,待磁珠完全聚集后,小心吸除残液。
注:磁珠在使用前一定要涡旋或震荡混匀。如有必要,可适当增加磁珠用量,延长结合时间以提高得率。
4. 加入600 µl Buffer WB1,轻柔震荡使磁珠分散开,颠倒两次后将离心管置于磁力架的磁场中,待磁珠完全聚集后,尽量吸净残液。
5. 选做:如果略去本步骤,通过本试剂盒抽提得到的RNA会含有少量基因组DNA。后续如进行某些对基因组DNA残留较敏感的实验时,可在上一步骤洗涤后,在磁珠中加入80 µl含2 µl DNase的酶溶液(每80 µl酶溶液按照71.8 µl水加8 µl Reaction Buffer(10X)再加2 µl DNase混合配制而成),37ºC放置消化15-30 min。消化结束后,不需要进行任何额外的操作,直接进入步骤6。
6. 加入600 µl Buffer WB2,轻柔震荡使磁珠分散开,颠倒两次后将离心管置于磁力架的磁场中,待磁珠完全聚集后,尽量吸净残液。
7. 重复步骤6一次。
8. 将离心管室温放置5-10 min,或置于37ºC鼓风烘箱5 min,确保残留的乙醇等微量液体完全挥发。加入50-100 µl Buffer EB,轻柔震荡使磁珠悬于溶液中,室温孵育3-5 min,其间甩动离心管1-2次。将离心管置于磁场中,待磁珠完全聚集后,小心吸取溶液至新离心管中,置于-20ºC保存。所得溶液即为纯化的RNA。
注:如需获得更高浓度的样品,可把Buffer EB的体积减小至20 µl,但洗脱下来的RNA量会相对减少。室温较低时,Buffer EB在37ºC预热片刻对得率有所帮助。此外,洗脱后的溶液再次加回到原磁珠再洗脱一次,可提高得率约10-30%;或者在第一次洗脱后使用新的Buffer EB再洗脱一次,会获得约为第一次洗脱量15-40%的RNA。
Q:为什么RNA得率低?
A:样本质量或量不足;白细胞数量变异;裂解或结合不充分;RNA洗脱效率低;操作过程中RNA降解;磁珠残留或丢失等。
Q:为什么RNA纯度差(A260/A280或A260/A230比值异常)?
A:A260/A280比值偏低(<1.8):蛋白质污染(酚在280 nm处也有吸收,但磁珠法无需酚抽提,所以蛋白污染是主因)。
A260/A230比值偏低(<2.0):盐离子(如胍盐、乙醇)或碳水化合物等小分子杂质残留。