动物总RNA提取试剂盒（离心柱式）

RNA提取/动物总RNA提取试剂盒（离心柱式）

动物总RNA提取试剂盒（离心柱式）

从动物组织或培养的动物细胞中安全、快速、便捷、稳定、高效、高质量地提取总RNA的试剂盒。

产品货号	产品规格	目录价	促销价
HX3016	50 T	632.00	568.00

▍产品信息

动物总RNA提取试剂盒（离心柱式）是一种基于离心柱法从动物组织或培养的动物细胞中安全、快速、便捷、稳定、高效、高质量地提取总RNA的试剂盒。总RNA包括大于200个核苷酸的RNA（也常被称为总RNA）和小于200个核苷酸的小RNA（small RNA）。动物组织或细胞中的RNA按照长度可以分为长链RNA（long RNA）和小RNA（small RNA），长链RNA通常大于200 nt，而小RNA通常小于200 nt。长链RNA按照是否编码蛋白或多肽可以分为长链非编码RNA（long noncoding RNA, lncRNA）和mRNA。小RNA主要包括非编码的5.8S rRNA、5S rRNA、tRNA、microRNA、siRNA、piRNA、tsRNA、srRNA等。本试剂盒使用安全，通过特殊的柱纯化介质进行总RNA分离纯化，能有效避免传统的Trizol法抽提时使用的酚、氯仿等有毒有害有机试剂；使用快速、便捷，采用柱纯化，无需繁琐的RNA沉淀步骤，抽提操作过程仅25-30 min。相比于传统的Trizol提取法，操作流程显著简化，缩短了提取时间，降低了RNA降解的风险；提取总RNA的得率高，提取效果经反复测试，100万个冻存的HeLa细胞能提取得到约15-20 µg总RNA，5 mg冻存的小鼠肝组织能提取得到约6-10 µg总RNA，5 mg冻存的小鼠肾组织能提取得到约3-5 µg总RNA，不同来源的样品可能有所差异，通常新鲜样品的得率高于冻存样品；提取得到的总RNA纯度高，显著优于Trizol方法，提取得到的总RNA的A260/A280通常为2.0-2.2，A260/A230通常为1.9-2.1。

本试剂盒适用于新鲜或冻存的动物组织或细胞总RNA与小RNA的提取，推荐的细胞用量为50-100万，组织用量为3-5mg。提取得到的RNA可用于反转录、RT-PCR、qPCR、Northern、点杂交、纯化mRNA、体外翻译、RNase protection assay、cDNA克隆等下游实验；也可用于基因表达芯片分析高通量测序等对RNA质量要求较高的情况。

▍产品应用

基于离心柱法从动物组织或培养的动物细胞中安全、快速、便捷、稳定、高效、高质量地提取总RNA。

▍产品保存

室温保存，一年有效。

▍产品组分

组分编号	组分名称	规格 50 T
HX3016-1	Buffer S1（裂解液）	16 ml
HX3016-2	Buffer P1（结合液I）	16 ml
HX3016-3	Buffer P2（结合液II）	38 ml
HX3016-4	Buffer WB1（洗涤液I）	32 ml
HX3016-5	Buffer WB2（洗涤液II）	63 ml
HX3016-6	Buffer EB（洗脱液）	5 ml
HX3016-7	RNA纯化柱及废液收集管	50套
HX3016-8	RNA洗脱管	50个

▍注意事项

1. 对于富含RNase的样品（如动物组织），建议使用前在Buffer S1中添加二硫苏糖醇（Dithiothreitol, DTT）至终浓度为40mM（如1 ml Buffer S1中加入20 µl 2 M DTT）或β-巯基乙醇至终浓度为1%（如1 ml Buffer S1中加入10 µl β-巯基乙醇），含DTT或β-巯基乙醇的裂解液可在室温放置1个月。

2. 通过本试剂盒提取得到的RNA已经去除绝大多数DNA，通常情况无需DNase处理。后续如进行某些对DNA残留较敏感的实验，则需要在使用说明中步骤5离心后，在纯化柱中加入适量DNase I进行消化，具体请参考使用说明。

3. 本试剂盒提供的所有试剂和耗材都是RNase-free，操作时应小心，避免被污染。所有自行准备的试剂和耗材也都应是RNase-free。如果可能有RNase污染，可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后高温高压灭菌并烘干。操作时应避免对着样品或所使用的试剂盒耗材呼气或说话，以防RNase污染。建议戴一次性口罩操作。

4. 使用冻存的细胞或组织提取RNA 的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品中的RNA。进行保存以保证样品RNA的完整性。

5. 所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。

6. 废液收集管在一次提取中需多次使用，切勿中途丢弃。

7. Buffer P1、Buffer P2和Buffer WB2中含有乙醇，使用后须旋紧瓶盖以防挥发，并须按照易燃试剂的相关规范进行存放和使用。

8. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. 实验材料的准备，与样品的裂解：

a. 细胞样品：收集50-100万左右的细胞。对于悬浮细胞，1000-2000×g离心1 min后弃上清，加入300 μl Buffer S1，轻轻吹打8-10次至固悬物溶解、溶液澄清；对于贴壁细胞，吸净培养液后加入300 μl Buffer S1，轻轻吹打5-10次至固悬物溶解、溶液澄清，转移至一洁净离心管内。

b. 组织样品：取3-5 mg动物组织，置于液氮中研磨成粉末，立即加入300 µl Buffer S1。也可将组织置于1.5 ml离心管中，迅速加入300 µl Buffer S1，用微型电动匀浆器匀浆，或者用普通玻璃匀浆器进行匀浆。研磨或匀浆后，轻轻吹打匀浆液8-10次，室温放置3-5 min。然后约14,000×g离心2 min，将上清液移至新的离心管中。对于比较容易裂解且匀浆很充分的组织（如肝组织、脑组织等）可以不用高速离心而直接进入步骤2。

注：细胞的数量一般不超过200万，动物组织的用量一般不超过10 mg，用量过多可能会因裂解不充分导致得率下降。如果裂解后仍有粘稠物，需增加吹打次数至溶液完全澄清。对于富含RNase的样品，Buffer S1中宜添加DTT至终浓度为40 mM或添加β-巯基乙醇至终浓度为1%。

2. 加入300 µl Buffer P1至裂解产物中，轻轻颠倒混匀3-5次。此时可能会有沉淀物产生，属于正常现象。

3. 将混合物（包括沉淀物）转移至纯化柱内，12,000×g离心30 sec，回收收集管内液体至一新的1.5 ml离心管。

注：对于一些特殊的样品，如出现溶液未完全通过时，可延长离心时间至1-2 min，或者加大离心力至16,000×g。对于一些能快速启动达到12,000×g的离心机，离心30 sec已经足够，对于一些启动速度缓慢的离心机本步骤及后续步骤中的30秒离心宜调整为60 sec。

4. 向回收的液体中加入700 µl Buffer P2，混匀后，将混合物（包括沉淀物）分两次通过上一步的纯化柱，每次12000×g离心30 sec后倒弃收集管内液体。

注：加入Buffer P2后溶液总体积超过纯化柱的容量（约750 µl），因此须分成2次过柱，即将一半的混合物（约650 µl）加入纯化柱内后12000×g离心30 sec，倒弃收集管内液体，再将剩余的混合物加入纯化柱内12000×g离心30 sec，并倒弃收集管内液体。

5. 加入600 µl Buffer WB1，12,000×g离心30 sec，倒弃收集管内液体。

6. 选做：通过本试剂盒抽提得到的RNA已经去除绝大多数DNA，通常情况无需DNase处理。后续如进行某些对DNA残留较敏感的实验时，可在本步骤离心后，在纯化柱中加入80 µl含10 U DNase I的酶溶液（每80 µl酶溶液按照71.8 µl水加8 µl 10X Reaction Buffer加0.2 µl 50 U/μl DNase I混合配制而成），室温放置消化15 min。消化结束后，不需要进行离心等任何额外的操作，直接进入步骤7。

7. 加入600 µl Buffer WB2，12,000×g离心30 sec，倒弃收集管内液体。

8. 重复步骤7一次。

9. 最高速（约14,000-16,000×g）离心2 min，去除残留的液体。

10. 将RNA纯化柱置于RNA洗脱管中，加入30-50 µl Buffer EB，室温放置2-3 min，最高速离心30 sec，所得溶液即为纯化的总RNA。

注：Buffer EB需要加到纯化柱柱面中央，使其被完全吸收。如需获得更高浓度的样品，可把Buffer EB的体积减小至20 µl，但洗脱下来的总RNA量会相对减少。室温较低时，Buffer EB在37ºC预热片刻对得率有所帮助。此外，洗脱后的溶液再次加回到原纯化柱再离心洗脱一次，可提高得率约10-30%；或者在第一次洗脱后使用新的Buffer EB再洗脱一次，会获得约为第一次洗脱量15-35%的RNA。

下载产品使用说明书

Q：为什么RNA得率过低（产量低）？

A：样本量过多或过少；组织/细胞没有完全裂解；RNA在吸附柱上结合不完全；离心速度或时间不足；RNA没有完全洗脱；样本本身RNA含量低或降解严重等。

Q：为什么RNA会降解？

A：RNase污染；实验操作温度过高；细胞/组织处理不当等。

Q：为什么会有基因组DNA污染？

A：样本量过大、裂解不充分或gDNA清除步骤操作不当等。

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