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RNA提取/植物总RNA提取试剂盒(离心柱式)
植物总RNA提取试剂盒(离心柱式)
植物总RNA提取试剂盒(离心柱式)
植物总RNA提取试剂盒(离心柱式)
从不同植物物种和组织类型中快速、高效地小量提取植物总RNA的试剂盒。


产品货号

产品规格

目录价

促销价

HX3013

50 T

645.00

580.00


产品信息

植物总RNA提取试剂盒(离心柱式))是一种能从不同植物物种和组织类型中快速、高效地小量提取植物总RNA的试剂盒。采用离心柱方式提取植物总RNA,无需使用有毒的苯酚-氯仿提取,整个提取过程只需30~40 min,即可获得植物总RNA,更安全且节约时间,适用于不同植物的根、茎、叶片和芽等部位的植物总RNA提取,具有稳定、高效、安全、便捷的优点。试剂盒采用膜过滤及DNase I 消化,可更高效地去除基因组DNA,提取的总RNA纯度高,基本没有蛋白和其他杂质的污染,可直接用于RT-PCR、NorthernBlot、PolyA纯化,核酸保护和体外翻译等实验。本试剂盒适用于各种普通植物组织样品的总RNA提取。


产品应用

能从不同植物物种和组织类型中快速、高效地小量提取植物总RNA。


产品保存

室温保存12 个月,RNase-Free DNase I和DNase Buffer置于-20℃保存。


产品组分

组分编号

组分名称

规格

50 T

HX3013-1

Buffer P1(裂解液,加入β-巯基乙醇至终浓度1%)

30 ml

HX3013-2

Buffer P2(去蛋白液)

40 ml

HX3013-3

Buffer WB(漂洗液,第一次使用前需加入48 ml无水乙醇)

12 ml

HX3013-4

RNase-Free ddH2O

15 ml

HX3013-5

RNase-Free DNase I

100 μL

HX3013-6

DNase Buffer

1.5 mL

HX3013-7

过滤柱

50套

HX3013-8

吸附柱

50套


注意事项

1. 由于植物样品种类的多样性,且同一植物的不同生长发育阶段和不同组织的RNA含量都不相同,请根据具体实验情况选择合适的植物材料 用量。

2. 使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染,经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌、汗液及RNase等,可能导致RNA降解。

3. RNA在裂解液中时不会被RNase降解,但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿;玻璃器皿可在150℃烘烤4 h,塑料 器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10 min,然后用水彻底清洗、灭菌。

4. 操作前在Buffer P1中加入β-巯基乙醇至终浓度1%,现配现用,如1 mL Buffer P1中加入10 μL β-巯基乙醇。加过β-巯基乙醇的Buffer P1置于2~8℃可保存一个月,在储存时可能会形成沉淀,若有沉淀出现,请加热溶解后使用。

5. DNase I 工作液的配制:2 µL DNaseI+28 µL DNase Buffer,轻轻吹打混匀,现用现配。

6. 第一次使用前应在Buffer WB中加入 48 mL 的无水乙醇,混匀,并在瓶上做好标记。

7. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. 样品处理:取50~100 mg植物组织样品,使用液氮将样品充分研磨至粉末状,立即加入450 µL Buffer P1(使用前请先检查是否已加入β- 巯基乙醇),高速涡旋震荡混匀。

注:若取样量过多或者加入裂解液后液体较粘稠,可减去部分吸头末端,若仍不好吸取,可在步骤2前先将样品于12,000 rpm离心2min,取 上清再进行步骤2过滤。

2. 将所有溶液转移至过滤柱中,12,000 rpm(~13,400×g)离心2~5 min,小心吸取收集管中的上清至RNase-Free的离心管中,吸头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。

3. 加入0.5 倍滤液体积无水乙醇(通常为225 μL),用移液枪吸打3~5次充分混匀(此时可能会出现沉淀),将得到的溶液和沉淀一起转入  吸附柱中,12,000 rpm(~13,400×g)离心 30~60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。

注:如果滤液体积有损失,请相应调整乙醇的加量。

4. 向吸附柱中加入350 μL Buffer P2,12,000 rpm(~13,400×g)离心30~60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。

5. DNase I 工作液配制:2 µL RNase-Free DNase I +28 µL DNase Buffer,轻轻吹打混匀。

6. 向吸附柱中央加入30 μL的DNase I 工作液,室温放置15min。

7. 向吸附柱中加入350 μL Buffer P2,12,000 rpm(~13,400×g)离心30~60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。

8. 向吸附柱中加入500 μL Buffer WB(使用前请确认是否已加入无水乙醇),室温静置2min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 30~60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。

9. 重复步骤8。

10. 12,000 rpm离心 2 min,倒掉废液。将吸附柱置于室温放置数分钟,彻底晾干吸附柱中残余的Buffer WB。

注:目的是将吸附柱中残余的Buffer WB去除,Buffer WB的残留,可能会影响后续的RT等实验。

11. 将吸附柱放入一个新的RNase-Free离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加30~100 μL RNase-Free dd H2O,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,得到 RNA 溶液,将洗脱的RNA置于-80℃保存(洗脱液体积过小影响回收效率,柱子最小的洗脱体积是30 µL)。

Q:样品要怎样预处理?

A:快速操作:植物组织采集后立即液氮冷冻,防止RNA降解。

      充分研磨:确保组织在液氮中彻底研磨成细粉,避免残留块状物影响裂解效率。

      抑制RNase活性:Buffer P1中需含强变性剂(如异硫氰酸胍)或β-巯基乙醇,以抑制植物中丰富的RNase。

Q:怎样洗脱RNA? 

A:无RNase水预热:用50-60℃的无RNase水洗脱可提高得率(避免高温破坏RNA)。

      洗脱体积:少量多次(如30 μL×2次)比单次大体积洗脱更高效。

      离心前静置:洗脱时静置1-2 min再离心,增加RNA溶出效率。

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