产品货号 | 产品规格 | 目录价 | 促销价 |
HX3013 | 50 T | 645.00 | 580.00 |
▍产品信息
植物总RNA提取试剂盒(离心柱式))是一种能从不同植物物种和组织类型中快速、高效地小量提取植物总RNA的试剂盒。采用离心柱方式提取植物总RNA,无需使用有毒的苯酚-氯仿提取,整个提取过程只需30~40 min,即可获得植物总RNA,更安全且节约时间,适用于不同植物的根、茎、叶片和芽等部位的植物总RNA提取,具有稳定、高效、安全、便捷的优点。试剂盒采用膜过滤及DNase I 消化,可更高效地去除基因组DNA,提取的总RNA纯度高,基本没有蛋白和其他杂质的污染,可直接用于RT-PCR、NorthernBlot、PolyA纯化,核酸保护和体外翻译等实验。本试剂盒适用于各种普通植物组织样品的总RNA提取。
▍产品应用
能从不同植物物种和组织类型中快速、高效地小量提取植物总RNA。
▍产品保存
室温保存12 个月,RNase-Free DNase I和DNase Buffer置于-20℃保存。
▍产品组分
组分编号 | 组分名称 | 规格 50 T |
HX3013-1 | Buffer P1(裂解液,加入β-巯基乙醇至终浓度1%) | 30 ml |
HX3013-2 | Buffer P2(去蛋白液) | 40 ml |
HX3013-3 | Buffer WB(漂洗液,第一次使用前需加入48 ml无水乙醇) | 12 ml |
HX3013-4 | RNase-Free ddH2O | 15 ml |
HX3013-5 | RNase-Free DNase I | 100 μL |
HX3013-6 | DNase Buffer | 1.5 mL |
HX3013-7 | 过滤柱 | 50套 |
HX3013-8 | 吸附柱 | 50套 |
▍注意事项
1. 由于植物样品种类的多样性,且同一植物的不同生长发育阶段和不同组织的RNA含量都不相同,请根据具体实验情况选择合适的植物材料 用量。
2. 使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染,经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌、汗液及RNase等,可能导致RNA降解。
3. RNA在裂解液中时不会被RNase降解,但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿;玻璃器皿可在150℃烘烤4 h,塑料 器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10 min,然后用水彻底清洗、灭菌。
4. 操作前在Buffer P1中加入β-巯基乙醇至终浓度1%,现配现用,如1 mL Buffer P1中加入10 μL β-巯基乙醇。加过β-巯基乙醇的Buffer P1置于2~8℃可保存一个月,在储存时可能会形成沉淀,若有沉淀出现,请加热溶解后使用。
5. DNase I 工作液的配制:2 µL DNaseI+28 µL DNase Buffer,轻轻吹打混匀,现用现配。
6. 第一次使用前应在Buffer WB中加入 48 mL 的无水乙醇,混匀,并在瓶上做好标记。
7. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
1. 样品处理:取50~100 mg植物组织样品,使用液氮将样品充分研磨至粉末状,立即加入450 µL Buffer P1(使用前请先检查是否已加入β- 巯基乙醇),高速涡旋震荡混匀。
注:若取样量过多或者加入裂解液后液体较粘稠,可减去部分吸头末端,若仍不好吸取,可在步骤2前先将样品于12,000 rpm离心2min,取 上清再进行步骤2过滤。
2. 将所有溶液转移至过滤柱中,12,000 rpm(~13,400×g)离心2~5 min,小心吸取收集管中的上清至RNase-Free的离心管中,吸头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。
3. 加入0.5 倍滤液体积无水乙醇(通常为225 μL),用移液枪吸打3~5次充分混匀(此时可能会出现沉淀),将得到的溶液和沉淀一起转入 吸附柱中,12,000 rpm(~13,400×g)离心 30~60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
注:如果滤液体积有损失,请相应调整乙醇的加量。
4. 向吸附柱中加入350 μL Buffer P2,12,000 rpm(~13,400×g)离心30~60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
5. DNase I 工作液配制:2 µL RNase-Free DNase I +28 µL DNase Buffer,轻轻吹打混匀。
6. 向吸附柱中央加入30 μL的DNase I 工作液,室温放置15min。
7. 向吸附柱中加入350 μL Buffer P2,12,000 rpm(~13,400×g)离心30~60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
8. 向吸附柱中加入500 μL Buffer WB(使用前请确认是否已加入无水乙醇),室温静置2min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 30~60 sec,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
9. 重复步骤8。
10. 12,000 rpm离心 2 min,倒掉废液。将吸附柱置于室温放置数分钟,彻底晾干吸附柱中残余的Buffer WB。
注:目的是将吸附柱中残余的Buffer WB去除,Buffer WB的残留,可能会影响后续的RT等实验。
11. 将吸附柱放入一个新的RNase-Free离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加30~100 μL RNase-Free dd H2O,室温放置2 min,12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 min,得到 RNA 溶液,将洗脱的RNA置于-80℃保存(洗脱液体积过小影响回收效率,柱子最小的洗脱体积是30 µL)。
Q:样品要怎样预处理?
A:快速操作:植物组织采集后立即液氮冷冻,防止RNA降解。
充分研磨:确保组织在液氮中彻底研磨成细粉,避免残留块状物影响裂解效率。
抑制RNase活性:Buffer P1中需含强变性剂(如异硫氰酸胍)或β-巯基乙醇,以抑制植物中丰富的RNase。
Q:怎样洗脱RNA?
A:无RNase水预热:用50-60℃的无RNase水洗脱可提高得率(避免高温破坏RNA)。
洗脱体积:少量多次(如30 μL×2次)比单次大体积洗脱更高效。
离心前静置:洗脱时静置1-2 min再离心,增加RNA溶出效率。